文章來源：中華消化外科雜誌,2018,17（4）
【接上文】
三、外泌體臨床轉化的挑戰
儘管各類體液中都含有外泌體，但僅有血液、唾液和膽汁被報道用於消化系統腫瘤診斷與治療。血液中外泌體的檢測仍是目前研究的重點和熱點。外泌體的分離和純化技術尚不完善，現有的多種方法包括超速離心法、連續過濾法(層析法)、沉澱法(基於聚乙二醇)、微流體技術法、免疫親和捕捉法及一系列商業化方法。
這些方法提取外泌體的效率和純度是否一致仍有待進一步研究，這間接導致類似研究獲得的結果並不一致或重複性不佳，多數研究中僅證實了所用方法的靈敏度，而較少涉及其特異度的論證。導致上述現象的原因是，某些方法被髮明時僅用於提取細胞上清液中外泌體，現在卻被應用於血清或血漿樣本檢測。
此外，外泌體的臨床轉化研究尚面臨一系列挑戰：
(1)基於血漿的外泌體研究中，大部分方法在提取外泌體的同時也提取出豐富的血漿遊離蛋白，對進一步的分析和研究造成極大困擾。如何在提取後進一步純化外泌體應引起研究者重視。
(2)外泌體具有一定生物活性，在提取和分離過程中應保持該性質，或可應用於個體化免疫治療。
(3)外泌體提取、保存、檢測方法的標準化和統一。現有的多種外泌體提取和富集方法各有優劣，但多數方法對純度控制欠佳，很大程度上影響功能研究的可重複性和臨床應用標準化。
(4)現有方法成本較高。以傳統金標準提取方法——超速離心法為例，其耗時長、成本高、得率較低，從實驗室研究角度尚難以接受。故大量研究轉而選擇了提高得率、降低純度、減少耗時和成本的提取方法，進入臨床應用阻力巨大。外泌體檢測的一大優勢是創傷極小，在消化系統腫瘤篩查中具有巨大優勢，而檢測成本可能是限制其應用的最大阻力。
綜上，轉化至臨床應用的外泌體提取純化技術必須在確保其穩定性的基礎上，努力在純度、生物活性保持及成本控制3者間尋求平衡，力爭達到操作簡便、高通量且成本合理。外泌體提取純化技術根據臨床目的不同也應各有取捨，如：用於疾病篩查時，應著眼於降低成本，在不影響診斷特異度前提下放寬對純度的要求，不追求外泌體生物活性的保持。
四、結語
外泌體中包含大量生物活性物質，包括蛋白質、核酸和脂類，通過在不同細胞間傳遞信息發揮重要病理生理功能。循環中的腫瘤細胞源性外泌體在腫瘤發生、發展中也起重要作用，有望作為分子標誌物用於腫瘤早期診斷和復發監測，並作為潛在治療靶點。
對腫瘤細胞源性外泌體的蛋白組學和遺傳組學研究仍是將來重點，而以臨床轉化為目標的研究應在提高外泌體穩定性、純度和生物活性保持等方面不斷努力，力求通過外泌體檢測這一微創手段代替有創手段進行腫瘤的精準診斷與分期治療。
參考文獻【略】
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