(一)原理
MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT（噻唑藍）為基礎。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用於活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環開裂，生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可以用DMSO來溶解，利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。
(二)操作（實用於貼壁細胞）
1.接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.:培養細胞：同一般培養條件，培養2-3天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。
3.顯色：分別培養不同時間，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對於懸浮細胞需要離心後再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振盪10分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色：選擇570nm波長，在酶聯免疫檢測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫座標，吸光值為縱座標繪製細胞生長曲線。
(三)結果
以時間為橫軸，光吸收值為縱軸繪製細胞生長曲線或計算細胞生長抑制率、細胞相對增殖率等。
【注意事項】
1.選擇適當得細胞接種濃度。
2.避免血清干擾：一般選小於10％的胎牛血清的培養液進行試驗。在顯色後儘量吸盡孔內殘餘培養液。
3.設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，最後比色以空白調零。每組設定3復孔。
4.MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。
5.酶聯免疫檢測儀使用前應打開電源預熱半小時。
6.選擇不同的波長，酶聯免疫檢測儀檢測靈敏度不同。應根據實驗目的選擇相應的波長。
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