丁香酚對高粱醇溶蛋白可食性膜結構 及性能的影響

摘要：為開發天然的可降解、可食性包裝材料，以高粱醇溶蛋白為原料，採用溶液共混的方法制備可食性丁香酚/高粱醇溶蛋白複合膜，分析不同濃度丁香酚對可食性高粱醇溶蛋白膜物理性能及微觀結構的影響並探討其變化機理。結果表明，添加4%丁香酚可優化蛋白膜的機械性能，提升膜的拉伸強度（TS）和斷裂伸長率（EAB）；添加丁香酚不影響膜的水蒸氣透過係數（WVP），但略微提高了膜的溶解度；添加4%丁香酚可增加膜對紫外光和可見光的吸光度值，即增強膜的光阻隔性能。DSC測量顯示，添加丁香酚後使得高粱醇溶蛋白的玻璃態轉變溫度（Tg）降低了，表明丁香酚提高了丁香酚/高粱醇溶蛋白複合膜的延展性；FTIR分析結果表明，添加丁香酚後使得高粱醇溶蛋白二級結構中的α-螺旋、無規則捲曲轉變為β-摺疊、β-轉角，表明丁香酚有助於提高丁香酚/高粱醇溶蛋白複合膜的機械性能；SEM結果顯示，4%丁香酚與高粱醇溶蛋白的相容性良好，製備的複合膜截面光滑緊緻。本研究結果為可降解、可食性膜新材料的研究及應用推廣提供了理論參考。

關鍵詞：高粱醇溶蛋白膜；丁香酚；疏水性；微觀結構

Effect of Eugenol on Performance and Structure of Kafirin Films

Abstract: In order to develop natural degradable and edible packaging materials, the objective of this study used kafirin as raw material, adding different concentrations (0%, 2%, 4%, 6%, 8%, w/w) eugenol, to make eugenol/kafirin composite films by a blending method. Comparing the mechanical, water-related, optical and thermal properties of films, the effects of the interaction between eugenol and kafirin molecules about the structure and properties of the composite films was investigated. The results showed that the 4% eugenol would optimiz the mechanical properties of the protein films, improve tensile strength (TS) and elongation at break (EAB); the addition of eugenol did not affect the water vapor permeability of the films, but slightly increased the solubility; 4% eugenol increased the absorbance of the films to ultraviolet light and visible light, that is, the barrier properties to light of the films increased. The results of DSC showed that eugenol reduced the glass transition temperature (Tg) of the protein films, indicating that the eugenol increased the ductility of the protein films; FTIR analysis showed that eugenol led to the secondary structure transition, from α-helix and random coil to β-sheet and β-turn, indicating that the eugenol could effectively improve the mechanical properties of the composite films. SEM also showed that 4% concentration of eugenol had good solubility with kafirin, the films section of that was smooth and firm, which can be appeared regular lines. The results show that the eugenol has good compatibility with kafirin, and the concentration of eugenol has a significant effect on the performance of kafirin films. 4% eugenol is a suitable addition amount of kafirin composite films which has high mechanical properties, good barrier properties and excellent thermal stability.

Key words: kafirin film, eugenol, hydrophobicity, microstructure

可食性包裝薄膜是以可食性生物大分子為主要成膜基質，通過流延、吹塑、自然乾燥等工藝，藉助分子之間的相互作用而形成的一種具有一定力學性能和阻隔性能的薄膜。目前，國內外有眾多報道關於可食性、可降解膜材料的研究，如用糖類、蛋白質、脂類等生物大分子制膜，其中玉米澱粉可降解購物袋[1]更是已經完成工業生產，走進了人們的日常生活中。而植物蛋白質因其安全無毒、生物相容性高及環境友好等特點成為製作新型可食性膜的優選材料之一，如大麥醇溶蛋白膜[2]、大豆分離蛋白膜[3]、高粱醇溶蛋白膜[4]等。

高粱醇溶蛋白中含有較多的疏水性氨基酸（如丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸等），其在水中的溶解度低，製備的蛋白膜對水和氣體均具有良好的阻隔性能[5]。但單一的高粱醇溶蛋白膜較脆，塑性較差，限制了其在食品包裝領域中的應用。為改善高粱醇溶蛋白膜的性能，Giteru等[6]在高粱醇溶蛋白膜中添加活性物質檸檬醛和槲皮素，研究發現二者均可改善其性能；後來Giteru等[4]進一步將檸檬醛/槲皮素-高粱醇溶蛋白複合膜用於新鮮雞肉的包裝與儲藏，與對照組相比，複合膜組具有維持和改善雞肉品質的潛力。

丁香酚為醇溶性酚類物質，具有良好的生物活性，如抗菌、抗真菌、殺蟲和抗氧化等性能。且研究表明，酚類化合物可與蛋白質發生相互作用，從而改善蛋白膜的特性[7]。張慧芸等[8]在玉米醇溶蛋白膜中加入丁香酚類物質，改善了蛋白膜的機械性能，使得蛋白膜的阻隔性和透溼性增強了。

現有的獻中對高粱醇溶蛋白膜的研究報道主要集中在理化性能，有關膜的光學屬性、熱特性、微觀結構等反映其變化機理的研究鮮見報道。因此，本研究以高粱醇溶蛋白為原料，通過添加丁香酚，分析不同濃度丁香酚對可食性高粱醇溶蛋白膜物理性能及微觀結構的影響並探討其變化機理，旨在為高粱醇溶蛋白應用於可降解、可食性膜新材料的後續研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白高粱粉（食品級，粉末），購自西安晉恆化工有限公司；丁香酚（純度> 98%，食品級）、無水乙醇（分析純）、焦亞硫酸鈉（分析純）、氫氧化鈉（分析純）、鹽酸（分析純），均購自國家藥品監管部門許可機構

1.2 主要儀器與設備

SpectraMax- i3酶標儀，美國Molecular Devices公司；TA.XT Plus-01質構儀，英國SMSTA公司；200-F3型差示掃描量熱儀，德國NETZSCH公司；Tensor-27型傅里葉紅外光譜儀，德國Bruker公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 高粱醇溶蛋白的提取 參照李曉輝等[9]的方法。取0.5 kg白高粱粉，加入2 L 70 %（v/v）乙醇溶液，7 g氫氧化鈉（0.35 %，w/v）、10 g焦亞硫酸鈉（0.5 %，w/v）作為還原劑，在70 ℃水浴條件下恆溫振盪浸提4 h。將所得混合液離心（5000 rmp，10 min）取上清液。用蒸餾水（< 10 ℃，1:1（v/v））沉澱蛋白；1 M鹽酸調節溶液的PH值至5.5 左右，緩慢攪拌溶液，到白色絮狀沉澱逐漸析出。靜置一夜，離心取沉澱，冷凍乾燥蛋白沉澱（-20 ℃）。用正己烷（1:10 （w/v））脫脂，得到高粱醇溶蛋白，儲藏於乾燥器中備用。

1.3.2 可食用膜的製作 取6.0 g高粱醇溶蛋白，加入1.48 g增塑劑（聚乙二醇﹕甘油=1:1）和60 mL 85%乙醇溶液，緩慢攪拌均勻，然後置於80 ± 2℃的水浴鍋中攪拌15 ± 2 min，再於40 ± 2℃的恆溫水浴鍋中冷卻，最後用85%乙醇溶液補充揮發的乙醇溶液。各試驗組中分別加入0%（對照，CK）、2%、4%、6%、8%(w/w)丁香酚，均質（6 000 r·min-1）2 min後於40℃、轉速為100 r·min-1條件下攪拌10 min，以除去氣泡。將成膜溶液緩慢倒在玻璃板上(0.09 g·cm -2)，50 ± 2℃靜止12 h。將乾燥成型的膜剝落，在進行理化試驗之前，將膜置於乾燥器中48 h以平衡水分。

1.3.3 可食用膜厚度的測定 參照周偉等[10]的方法。用千分測厚規測量膜的厚度（精確度：± 0.001 mm）。以膜中心為基準點，在距離中心點等距離的四角隨機取8 個點測量膜的厚度，結果取平均值，單位μm。

1.3.4 可食用膜機械性能的測定 用質構儀測量膜的拉伸強度（TS）、斷裂伸長率（EAB）。將膜剪成60×10 mm的條狀，初始夾距設為40 mm，拉伸速度設為1 mm·s-1。實驗之前將樣品提前24 h放於乾燥器中平衡水分。

1.3.5 可食用膜吸光度值的測定 用打孔器取直徑為6 mm的膜樣品緊貼於微孔底部，用酶標儀測定樣品在200-800 nm範圍內的吸光度值，掃描波長間隔5 mm。

1.3.6 可食用膜水蒸氣透過係數測定 參照McHugh等[11]的方法。在5 mL的小燒杯中加入5 mL去離子水，將膜剪成4 cm×4 cm，密封燒杯口，置於乾燥器中。間隔1.5 h稱重一次。得到樣品質量相對於時間變化的斜率。水蒸氣透過係數（Water Vapor Permeability, WVP）計算公式如下：

式中：WVTR（Water Vapor Transmission Rate）為膜的水蒸氣透過率（g/h·m2），由質量隨時間的變化率除以膜的封口面積（m2）得到。L是膜的平均厚度（mm）；ΔP為膜兩側水蒸氣分壓差（kPa）

1.3.7 可食用膜溶解性 參照Ahmad等[12]的方法。取28~32 cm2膜樣品，於105 ± 2 ℃鼓風乾燥箱中烘乾至恆重，記為 Wi；將樣品浸沒在40 mL去離子水中，用封口膜封住容器口，室溫下浸泡24 h。用濾紙過濾溶液，將濾紙和濾渣於105 ± 2 ℃鼓風乾燥箱中烘乾至恆重，記為Wf 。膜的水溶性（Water Solubility, WS）計算公式如下：

式中：wi、wf分別為膜初始重量以及濾渣最終重量

1.3.8 可食用膜DSC測定 參照Chen等[13]的方法。用分析天平稱取10～15 mg樣品，置於鋁製坩堝中壓片封口，放入DSC儀器中。用空鋁皿作為參照，氮氣作為保護氣和吹掃氣，流量分別為60 mL·min-1、20 mL·min-1。以10 ℃·min-1的升溫速率從20 ℃加熱至140 ℃。

1.3.9 可食用膜FTIR測定 參照Gu等[14]的方法。取乾燥至恆重的樣品0.2 mg，加入2 mg溴化鉀在研磨中研磨，取適量研磨均勻樣品壓片，在波長為400~4 000 cm-1的範圍內進行掃描，得到樣品在不同波長下的吸光度。

1.3.10 可食用膜二級結構分析 對樣品紅外光譜進行傅里葉變換去卷積，用PeakFit 4.11進行二階導數擬合，得到子峰數目在8~12之間，其殘差（r2）大於0.999。確認峰位歸屬，計算各分峰面積的相對百分含量。

1.3.11 掃描電鏡分析 參考鄒小波等[15]的方法。取1cm×4 cm膜樣品，液氮浸沒後進行人工折斷，將樣品粘貼於金屬圓臺上，真空狀態下噴金，然後置於掃描電鏡中，電子束加速電壓設為10.0 kV，在放大倍數1.0 k下拍照記錄。

1.3.12 數據分析 試驗數據均為3次重複的平均值，採用SPSS 17.0軟件對數據進行處理，用AVOVA法對數據進行方差分析，Duncan多重檢驗進行數據間的差異顯著性分析（

P＜0.05）。應用Origin 9.0繪製圖形。

2 結果與分析

2.1 丁香酚濃度對高粱醇溶蛋白膜厚度和機械性能的影響

由表1可知，高粱醇溶蛋白膜的厚度在116.56～136.11 μm範圍內，符合美國材料與實驗協會（ASTM）的標準（≤250 μm）[16]，與Taylor等[17]用70%乙醇溶液製備的高粱醇溶蛋白膜的厚度113 μm的實驗相一致。隨著丁香酚濃度的增加，蛋白膜的厚度先降低後增加，當丁香酚濃度為4%時，膜厚度達最小值（116.56 μm），表明4%丁香酚有利於膜內部各組分之間緊密交聯，這可能是因為在一定濃度範圍內添加丁香酚，高粱醇溶蛋白各組分間的疏水性相互作用降低，蛋白分子與多酚之間的氫鍵作用加強，從而膜內部交聯更加緊密，膜的厚度降低。

表1 丁香酚濃度對醇溶蛋白膜厚度、機械性能的影響

Table 1 Effect of eugenol concentration on the thickness and mechanical properties of kafirin film

注：同列不同小寫字母表示差異顯著 (P<0.05) 。下同。

Note: Different lowercase letters in the same line indicate significant difference at 0.05 level. The same as following.

添加丁香酚可顯著改變高粱醇溶蛋白膜的TS和EAB（

P<0.05）（表1），隨著丁香酚濃度的增加，TS先增加後降低，丁香酚濃度為4%時，TS有最優值；蛋白酶膜的EAB隨著丁香酚濃度的增加而增大，且變化顯著（P<0.05），當添加量高於4%後，丁香酚/醇溶蛋白膜的EAB變化不再顯著。添加一定濃度的丁香酚後，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的TS、EAB增大，表明隨著丁香酚濃度的增加，高粱醇溶蛋白分子間的疏水性相互作用減弱，多酚類物質中的羥基與醇溶蛋白分子中的氨基酸殘基和羧基結合形成氫鍵佔據主導，故膜基質內部交聯更加緊密，從而膜的強度增加。但當丁香酚濃度超過4%後，蛋白分子周圍聚集大量酚類物質的羥基，打斷了原有醇溶蛋白分子間的有序排列，多肽鏈間的流動性增大，因此膜內部分子之間的交聯減弱，拉伸應力降低，延展性持續增加。

2.2 丁香酚濃度對高粱醇溶蛋白膜對吸光度的影響

注：a、b、c、d、e分別表示0%（CK）、2%、4%、6%、8%丁香酚。

Note: a, b, c, d and e indicate 0%(Control), 2%, 4%, 6% and 8% eugenol, .

圖1 丁香酚濃度對醇溶蛋白膜吸光度的影響

Fig. 1 Effect of eugenol concentration on absorbance of kafirin film.

由圖1可知，在紫外波長（230～400 nm）範圍內，對照組（CK）的高粱醇溶蛋白膜出現一個吸收峰，這是因為高粱醇溶蛋白中含有帶苯環結構的芳香族氨基酸（酪氨酸和苯丙氨酸），其對紫外光具有一定的吸收能力；添加不同濃度的丁香酚後，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜吸收峰的吸光度值更高，這是因為丁香酚中的苯環結構和不飽和鍵對紫外光也具有一定的吸收能力。在可見光波長範圍（400~800 nm）內，隨著波長的增加，膜的吸光度逐漸降低，添加不同濃度的丁香酚後，膜的吸光度值與CK相比均有不同程度的增加。膜的吸光度值越高，透光率值越低，光阻隔性能越好。當丁香酚濃度為4%時，丁香酚/高粱醇溶蛋白複合膜對紫外、可見光的阻隔性能均出現最優值。綜上表明，添加4%丁香酚對高粱醇溶蛋白複合膜的性能有明顯的提升作用。

2.3 丁香酚濃度對高粱醇溶蛋白膜水溶性和水蒸氣透過係數(WVP)的影響

圖 2 丁香酚濃度對醇溶蛋白膜水溶性、水蒸氣透過係數的影響

Fig. 2 Effect of eugenol concentration on water solubility and WVP of kafirin film

由圖2可知，隨著不同濃度丁香酚的添加，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的水溶性顯著增加（

P<0.05），當丁香酚濃度為4%時，相比CK，膜的水溶性增加了7.1%，增幅最小，更適合作為高粱醇溶蛋白膜的改性劑；添加不同濃度的丁香酚後，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的水蒸氣透過係數（WVP）無顯著變化，這可能是因為膜的WVP受醇溶蛋白分子中極性基團的共價鍵、丁香酚分子內部羥基以及膜中水分子的擴散路徑影響[18]，也與成膜材料性能、各組分之間的相容情況有關。

2.4 差式掃描量熱儀分析結果

圖3 丁香酚/高粱醇溶蛋白膜DSC熱譜圖

Fig. 3 DSC thermograms of kafirin films incorporated with eugenol

由圖 3可知，對照組醇溶蛋白膜的Tg值為76.97℃，隨著丁香酚濃度的增加，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的Tg呈先下降後升高的變化趨勢。當添加丁香酚的濃度為4%，高粱醇溶蛋白複合膜的Tg值有最小值，為60.16℃。

2.5 傅里葉紅外光譜分析結果

圖4 丁香酚高粱醇溶蛋白膜傅里葉紅外光譜

Fig. 4 FTIR spectra of kafirin edible films incorporated with eugenol

對照組高粱醇溶蛋白膜的酰胺A峰（O-H伸縮振動峰[9]）在3407 cm-1處，隨著丁香酚添加濃度的逐漸增大，複合膜的酰胺A峰先紅移再藍移，分別為3398、3383、3395、3397 cm-1。

添加不同濃度丁香酚，酰胺B峰（-CH3和-CH的反對稱伸縮振動峰[9]）由2944.8 cm-1小幅度地紅移至2943.8、2942.8、2943.8、2944.8 cm-1。Henero等[19]研究顯示，-CH峰的位移受氨基酸殘基的疏水性影響，由此表明，添加丁香酚影響了高粱醇溶蛋白氨基酸殘基的疏水性，該結果印證了複合膜的水溶性增加以及Tg值降低的變化趨勢。

2.6 丁香酚濃度對高粱醇溶蛋白二級結構的影響

圖5 丁香酚高粱醇溶蛋白膜二級結構

Fig. 5 Content of Secondary of kafirin films containing eugenol

1600~1640 cm-1、1640~1650 cm-1、1650~1660 cm-1及1660~1700 cm-1之間的峰面積分別表徵β-摺疊、無規則捲曲、α-螺旋和β-轉角含量。由圖5可知，隨著丁香酚濃度的增加，複合膜的β-轉角含量增加，當丁香酚濃度為4%時，β-轉角含量出現最大值；α-螺旋、無規則捲曲含量隨著丁香酚濃度的增加而降低，當丁香酚濃度為4%時，兩者有最小值。上述表明，添加丁香酚改變了複合膜內部蛋白質的二級結構，α-螺旋、無規則捲曲結構轉化成β結構。

2.7 掃描電鏡分析結果

SHAPE \\* MERGEFORMAT

圖6 丁香酚醇溶蛋白膜截面掃描電鏡圖

Fig. 6 Cross-sectional images of kafirin film containing eugenol

由圖6可知，CK膜的表面和截面粗糙，有較多蛋白顆粒和小孔，蛋白溶解性不好；添加2%的丁香酚，膜截面平滑度增加，蛋白顆粒減少，小孔數量降低，表明丁香酚與蛋白相容性較好；添加4%的丁香酚，膜的微觀結構發生變化，膜表面小孔數量明顯降低，截面光滑緊緻，表明醇溶蛋白與丁香酚分子間結合良好，膜內部分子排列有序；繼續增加丁香酚的濃度，膜截面變得疏鬆，小孔增多。該結果與機械性能和二級結構的結果相對應，蛋白膜內部小孔數量越少，膜表面越平滑，二級結構中的β結構含量越多，機械性能相對越好[20]。

3 討論

我國每年產生塑料包裝垃圾超過數千萬噸，且數量加速增長，其不可降解性已經嚴重影響生態環境[21]，如由聚乙烯、聚氯乙烯等製成的包裝袋、保鮮膜等廢棄物，需要很長時間才能被大自然完全降解[22]。因此，開發安全、可降解、可食性的食品包裝已經成為綠色包裝領域的一大研究熱點，具有。

本研究結果表明，當丁香酚的濃度為4%時，丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的厚度、水溶性均有最優值；同時顯著提升了膜的機械性能（TS、EAB），增加了膜對紫外光和可見光的阻隔性；基本不影響複合膜的水蒸氣透過係數（WVP性能）。

結合傅里葉紅外光譜（FTIR）分析：未添加丁香酚，蛋白分子間的疏水性相互作用使得蛋白分子聚集在一起[23]，從而保證膜內部結構的完整性。在玉米醇溶蛋白中加入丁香酚，隨著多酚濃度的增加（2，4，%），由於小分子物質的穿透性，醇溶蛋白分子中的氨基與羰基同多酚物質中的羥基形成氫鍵，增加了蛋白多肽鏈間的網絡結構，因此FTIR圖中的O-H峰低波數位移，宏觀表現為丁香酚/高粱醇溶蛋白膜的機械性能增大、水溶性增加；然而，隨著丁香酚濃度持續增加（6，8，%），高粱醇溶蛋白分子之間的疏水性相互作用減弱，氫鍵佔據主導，膜基質內部交聯更加緊密，膜的強度增加，打斷了原有醇溶蛋白分子間的有序排列，多肽鏈之間的流動性增大，拉伸強度降低，延展性持續增加。Iman等[24]指出，蛋白分子間作用力增強時，會伴隨著吸收峰的紅移，本實驗中分子間相互作用呈現先增強後減弱的趨勢，這與複合膜的拉伸強度變化相一致。丁香酚濃度為4%時，膜的EAB為190.07%，優於Giteru等[6]製備的檸檬醛、槲皮素高粱醇溶蛋白膜的EAB 147.0%，實驗效果顯著。

對差式掃描量熱儀（DSC）檢測結果分析發現：添加丁香酚後，複合膜的Tg值呈現先降低後增加的變化趨勢。Ghanbarzadeh等[25]研究發現，親水性強的乳清蛋白膜的Tg值低於玉米醇溶蛋白膜的Tg值，基於此研究，Huo等[26]指出，Tg和材料的疏水性能成正比。因此，本試驗中添加不同濃度丁香酚，醇溶蛋白膜的Tg值降低印證了添加丁香酚後，複合膜水溶性略微變大的結果。

高粱醇溶蛋白是一種疏水性蛋白質，用其製成的蛋白膜結構緻密，對於環境中的水蒸氣有很好的阻隔性能。相比於已經商業化生產的大豆分離蛋白膜、魚鱗明膠膜，高粱醇溶蛋白膜的阻水性能更好。Otoni等[27]在大豆分離蛋白中加入丁香酚，複合膜的水蒸氣透過係數為1.06 ×10-10 g·s-1·m-1·pa-1，是本實驗中高粱醇溶蛋白膜水蒸氣透過係數的13.6倍；Nazmi等[28]用雞皮明膠製作明膠膜，其水蒸氣透過係數高達1.36×10-4 g.s-1.m-1.pa-1，為本實驗中高粱醇溶蛋白膜的106倍。

各試驗組膜的表面和截面均含有不同數量的小孔，這是因為高粱醇溶蛋白中含有較多的疏水性氨基酸。在成膜過程中添加親水性物質聚乙二醇、甘油作為增塑劑，親水能力較強的甘油、聚乙二醇很難與高粱醇溶蛋白中的疏水集團結合，在成膜過程，部分甘油和聚乙二醇從膜內部遷移到膜的表面，從而在膜的內部形成孔徑，表現在膜截面中為小孔。在一定濃度範圍內添加小分子物質丁香酚，複合膜中的氫鍵能較好的降低混合體系內部的吉布斯自由能，使各組分很好的相容[27]，因此，膜表面小孔數量降低。添加4%濃度的丁香酚與高粱醇溶蛋白相容良好，膜截面光滑緊緻，表面平整。

4 結論

本試驗結果表明，添加4%（w/w）丁香酚後，丁香酚/高粱醇溶蛋白可食性複合膜的水溶性略微增加，但複合膜的拉伸強度（TS）和斷裂伸長率（EAB）提升，且對紫外光和可見光的阻隔性增加，表明添加丁香酚有利於開發機械性能高、阻隔性能好、熱穩定性能優良的高粱醇溶蛋白膜材料，這解決了高粱醇溶蛋白膜材料黏性、延伸性及抗拉強度差的問題，其機械性能就能滿足實際生產需要。現有技術的研究主要是試驗室規模的操作和在食品中的應用，接下來需進一步優化蛋白質膜製備技術，提高可食性膜的物化性質。

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[31]

[32]

[33]

膜的表面電鏡圖×1.0 K

Surface×1.0 k

膜的截面電鏡圖×1.0 K

Cross-sectional×1.0 k

8%

0%

2%

4%

6%

依據修改後的中文摘要進行修改，建議修改後找英語好的專家老師進行潤色

與下一段過渡不自然，缺少銜接語句

上下句銜接不當，跳轉過快，請補充過渡語句

上下句銜接不當，跳轉過快，請補充過渡語句

請認真思考，重新梳理本段，注意前後句的銜接及整段文字的邏輯性

語句跳轉過快，前後邏輯性差，請重新梳理本段

請認真思考，重新梳理本段，注意前後句的銜接及整段文字的邏輯性

補充儀器型號

請簡潔表述醇溶蛋白的提取步驟

表述試驗步驟就行了，你這寫的是？

簡潔表述測定步驟

簡潔表述測定步驟

簡潔表述測定步驟

分析過淺，請認真斟酌試驗結果並進行合理分析

突出顯示部分建議放置在"討論"中，"結果與分析"部分僅需對現有試驗結果進行分析總結即可

有關結果的分析呢？

這不是圖中得來的。分析時請分清主次

請將結果與分析中的內容放置在討論中，並適當擴充討論內容

"討論"通常要具備以下要素：①對"結果"一章中試圖證明的原理、相互關係進行歸納性的解釋，是對"結果"進行論述，不重述。②指出論文的結果和解釋與前人成果的異同。③論述你的研究工作的理論含義以及實際應用的各種可能性。④指出任何的例外情況或相互關係中有問題出現的地方，並且應明確提出尚未解決的問題及解決的方向。

與前人研究結果作類比

請進行精簡

討論中不要重複前言內容

補全作者信息，不可用"等或et al"代替

文獻著錄格式有誤，核實修改

核實期刊頁碼

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