核酸檢測是新型冠狀病毒肺炎確診的重要手段，從提取到完成擴增檢測需要建立一個複雜且穩定的體系。由於國內有眾多的核酸提取試劑以及各種不同的操作程序和實驗體系，因此各實驗室分析的敏感性和特異性也存在差異。為了解我國新型冠狀病毒（2019⁃nCoV）核酸檢測的開展現狀及質量狀況，國家衛生健康委臨床檢驗中心（以下簡稱“臨檢中心”）於2020年3月16日~24 日開展了2019⁃nCoV 核酸檢測室間質量評價，並將檢測結果進行了統計分析。
近日，臨檢中心公佈了2020年《全國新型冠狀病毒核酸檢測室間質量評價結果報告》。根據報告，本次室間質評共涵蓋全國範圍的包括疾控中心、公立醫療機構（綜合性醫院、專科醫療機構、婦幼保健機構）、獨立醫學實驗室、海關所屬國際旅行醫療保健中心、試劑研發廠家、科研院所在內的1296家實驗室，共計收到844家實驗室的有效結果（即回報結果完整、在截止日期內回報的結果），其中合格實驗室701家（83.1%），不合格實驗室143家（16.9%），實驗室總體檢測情況良好。
結果統計
據悉，本次質評共發放12個質評樣本，各參評實驗室回報結果與官方標準答案完全相符判定為合格。質評樣本均為國家衛生健康委臨床檢驗中心製備，為基因工程方法制備的噬菌體病毒樣顆粒模擬樣本，無生物傳染危險性。該樣本適用於NMPA批准的新型冠狀病毒核酸檢測試劑，19種未批准的商品化試劑和32家不同實驗室自建方法。12個質評樣本中，進行統計的樣本為10個。
表：2020 年全國新型冠狀病毒核酸檢測室間質量評價樣本信息
表：各樣本總體符合率和複檢率
在實驗室使用試劑方法上，各實驗室使用的提取方法包括手工-柱提取法、自動化儀器-柱提取法、手工-磁珠提取法、自動化儀器-磁珠提取法和裂解法。提取試劑提取試劑種類較多，包括國家藥品監督管理局（NMPA）批准的新型冠狀病毒檢測試劑配套的核酸提取試劑以及其它核酸提取試劑。
表：各陽性樣本不同試劑檢測結果符合率和複檢率
表：各陰性樣本不同試劑檢測結果符合率和複檢率
在檢測方法方面，各實驗室使用的方法包括實時熒光RT-PCR、PCR-基因芯片、PCR-飛行時間質譜、轉錄介導的恆溫擴增、數字PCR 和高通量測序方法（包括宏基因組測序），檢測試劑包括NMPA 批准試劑以及實驗室自建方法。
表. 各陽性樣本不同方法檢測結果符合率和複檢率
表. 各陰性樣本不同方法檢測結果符合率和複檢率
改進方向
值得關注的是，臨檢中心在報告中表示，本次室間質評主要評價實驗室對2019-nCoV 核酸檢測的能力，重點考察實驗室檢測的分析性能，包括分析敏感性和分析特異性，雖然實驗室總體檢測情況良好，但同時也反映出一些問題。 在假陰性結果方面，導致檢測假陰性的原因涉及核酸提取和檢測兩個過程。儘管實驗室一般會很關注檢測試劑的性能，但實際上核酸提取試劑的質量也是檢測成功的關鍵環節之一。在本次室間質評中，各檢測試劑均存在與多個核酸提取試劑搭配使用的情況。即使採用同一核酸檢測試劑，但由於核酸提取試劑的不同，檢測的分析敏感性也必然會存在差異。此外，相同核酸提取純化試劑，各實驗室的檢測程序也有所不同。
與此同時，核酸檢測中各實驗室人員提取的操作能力存在差異，個別實驗室所有陽性樣本均未檢出。部分實驗室儘管檢出陽性樣本，但是從報告的Ct值來看，實際上也存在較大差異。此外，一些實驗室在檢測過程中缺乏質量控制，一些實驗室對單靶標陽性樣本解讀的能力不足。此外，97.5%（908/931）的回報結果使用實時熒光 PCR 法，各試劑的分析敏感性存在差異，不同靶區域的敏感性也存在差異。目前各試劑有單靶標、雙靶標和三靶標檢測的方式。臨檢中心強調，在疫情初期臨床病例數不足，方法設計尚無法進行充分的驗證。但是在現階段，試劑廠家應該已有一定數量的臨床數據，用來論證一些方法設計的依據是否科學。
在假陽性結果方面，從質評結果來看，假陽性率較低，出現 2 例或 2 例以上假陽性的實驗室共 7家（0.8%，7/844）。實驗室汙染（擴增產物遺留汙染和標本間交叉汙染）在少數實驗室存在。部分試劑存在和其它冠狀病毒的交叉反應。
綜上所述，臨檢中心最後對當前各實驗室需要改進的方面進行了總結：建議各試劑廠家根據目前臨床應用情況，總結臨床性能的數據；自建方法應加強對試劑性能的評價；臨床實驗室在開展檢測前或更換試劑批號時，應進行性能驗證，以發現不同試劑批號存在的差異以及驗證實驗室 檢測能力；臨床實驗室應使用參與核酸提取過程的弱陽性樣本和多份（如3份）陰性樣本，進行室內質量控制，以有效監測實驗室對弱陽性樣本的檢測能力和實驗室汙染；臨床實驗室人員應加強實驗操作和結果解讀能力的人員培訓。 參考資料：
1. 臨檢中心《全國新型冠狀病毒核酸檢測室間質量評價結果報告》
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