乾貨 | 靠譜 | 實用
導讀：今日，全國新冠病毒累計確診66576例，仍有疑似8969例。新冠肺炎龐大的潛在感染基數，要求臨床快速診斷和公共區域人員篩查工作準確迅速、嚴絲合縫，這也將是過濾新冠肺炎感染源、徹底阻斷病毒傳播的重要防線。然而，目前仍受限於檢測試劑盒的數目和靈敏度、儀器的可移動性等因素，無法對所有人進行核酸檢測和病毒排查。
CRISPR-Cas9基因編輯技術發明者，張鋒團隊，聯合哈佛、MIT和霍華德休斯醫學院等一眾頂級研究機構，推出了一款基於CRISPR技術的新冠病毒核酸檢測試紙，並公開了這項診斷技術的操作步驟。該技術目前正在尋求有足夠新冠肺炎病例數的合作機構，展開大規模臨床試驗，以期儘早將其推向應用一線。
這種診斷手段基於該團隊2019年9月在Nature Protocol發表的基於CRISPR系統的SHERLOCK技術（specific high-sensitivity enzymatic reporter unlocking），縮寫與大偵探夏洛克·福爾摩斯同名，旨在明察秋毫，迅速準確地檢測出微量目標核酸。
其原理是：由“鋸子”核酸內切酶Cas13，與病毒核酸互補先導RNA序列“探頭”形成檢測複合體，當複合體中的“探頭”檢測並結合目標病毒RNA後，“鋸子”Cas13酶即被激活，能夠“鋸斷”任何其他RNA。研究者設計了一種尾部拖有RNA的熒光蛋白，只有當其報告基團RNA被切斷時才會發光。於是，一旦Cas13酶複合體被互補序列激活，就能使原本沉默的熒光蛋白髮光，從而報告病毒核酸的存在。
SHERLOCK核酸檢測技術原理
此次的診斷工具中包含了專門識別新冠病毒殼蛋白S基因和開放閱讀框Ｏrf1ab基因互補片段，並且被綜合簡化為類似“驗孕棒”的可視化試紙。只要將試紙浸入初步純化過的核酸樣本中2-3分鐘，即以試紙上黑線的出現確定新冠病毒核酸的存在。試紙可檢出10-100拷貝數/微升的低濃度核酸，靈敏度極高。
基於CRISPR系統的核酸檢測試紙結果
病毒核酸樣本的初步純化方法與目前使用的qPCR的準備步驟相同。
實驗總共分為三步：1. 將RNA樣本42攝氏度等溫擴增25分鐘。
2. 將Cas13核酸內切酶、先導RNA加入步驟1樣本中37攝氏度孵育30分鐘。
3. 將檢測試紙浸入步驟2溶液中，5分鐘內顯示結果。
這項基於基因編輯工具CRISPR系統的技術，無需依賴大型儀器，可移動性強，靈敏度高，操作簡便，結果可視化，真正做到立等可取。目前，該技術還未得到足夠的臨床樣本檢驗，無法直接投向臨床，但其中的質粒、操作流程等信息已被全部公開，歡迎世界各地研究機構的嘗試和檢驗。如果這項技術能真正進入一線，那麼篩查範圍更廣，所需人力物力資源大幅減少，那麼人類有望更快拿下抗“疫”攻堅戰的勝利！
基於CRISPR的病毒診斷技術支持郵箱：
操作流程：
https://static1.squarespace.com/static/5b7c640be2ccd1703a3da4d3/t/5e46d16cf617da2f796f926e/1581699437272/COVID-19+detection+%28v20200214%29.pdf
參考文獻：
https://mcgovern.mit.edu/2020/02/14/enabling-coronavirus-detection-using-crispr-cas13-an-open-access-sherlock-research-protocol/
Max J. Kellner, et al. SHERLOCK: nucleic acid detection with CRISPR nucleases. 23 Sep, 2019.
閱讀更多 轉化醫學網 的文章
