北京博奧龍:胎牛血清製備、購買和使用過程中需要注意什麼?​‍

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什麼是胎牛血清?

胎牛血清是一種來自剖腹產的胎牛的血清,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少,其性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。

胎牛血清功能有哪些?

牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用於動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。

1、提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。

2、 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。

3、.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬熱原質結合,起到解毒作用。

4、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

5、.起酸鹼度緩衝液作用。

6、提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

如何成功製備胎牛血清?

具體胎牛血清製備操作方法如下:

第一步、血液採集

1、挑選出大約8月齡以上的健康妊娠母牛,經剖腹獲取小牛。

2、將小牛清洗乾淨後,側放在萬級潔淨房間內的採血臺上,固定四肢及頭部。

3、用來蘇水清洗心臟外部,颳去心臟外部牛毛,露出心臟外部一側皮膚,用2%碘酒擦拭消毒。

4、在心臟部位切開一道10釐米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血鉗夾住血管,切開1釐米左右的切口進行插管,插好管後打開血管的止血鉗,讓牛血順採血管流入另一個潔淨房間內的採血瓶中。

5、採血瓶採血前經幹烤滅菌(180℃ 2小時)後,按無菌操作注入10毫升左右經高壓滅菌的生理鹽水後加塞封口,於採血前半小時放入37℃恆溫箱備用。採血前先晃動瓶內生理鹽水,使其充分溼潤瓶壁後倒出,再進行採血並加塞封口。將採血後的採血瓶放37℃ 恆溫室2小時,再放入4℃冷庫 4小時以備離心。

第二步、離心

將準備好的採血瓶放入離心套筒調好平衡後,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘 離心50分鐘後,放入4℃冷庫備用。

第三步、抽血清

取出4℃冷庫離心好的採血瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機,用抽血清孔的管子輕輕抽取採血瓶內的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗製胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。

第四步、血清過濾

1、將-20℃冷庫內的粗製血清取出化凍。

2、將化凍後的粗製血清用經過高壓滅菌的12層醫用脫脂棉紗布進行初濾。

3、把初濾後的血清倒入大罐進行混合。

4、將裝好濾芯的濾器做密封性試驗和發泡試驗合格後,經過高壓滅菌,在潔淨室內用無菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進行組裝,並裝上壓力錶。把濾器大孔徑一端和蠕動泵出口進行連接。

5、用蠕動泵將大罐內的血清送入濾器進行過濾。

6、將濾出的血清在百級淨化操作檯上進行分裝後,即為精製胎牛血清,送-20℃冷庫儲存。

如何購買合格的胎牛血清?

1、生產是否合規,合格的胎牛血清生產廠家,一般需要獲得《牛血清生產企業達標合格證書》等類似證明,以保證其採血、混勻、過濾、灌裝等環節,嚴格執行GMP管理規範,全流程可追溯。

2、質量如何驗證,合格的胎牛血清,必須要通過嚴格的質量檢測,保證其低內毒素、低抗體、無噬菌體、無支原體、無抗生素殘留等。若出廠進行過細胞培養綜合評價、後續應用實驗驗證,則更具有質量保證。

3、來源地是哪裡,從源頭控制胎牛血清的質量,好的胎牛血清一定依賴優質的原料,產地可以選擇能提供優質的牧草、乾淨的水源、廣闊的空間,來養育足夠健康的牲畜。

4、研發團隊水平怎樣,為科研服務的品牌,如果沒有高水準的研發人員,就談不上質量提升。有專職研發團隊和豐富的團隊研發經驗,更有質量保證。

如何使用使用胎牛血清?

1、將血清從冷凍箱取出後,先置於2-8℃冰箱12-24小時左右使之溶解,然後在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。

2、切勿將剛剛從-20℃冰箱裡拿出來的血清直接放在水浴中,無論室溫的水或者37℃的水,因為在水浴中血清迅速熔化,很大的溫差(-20℃到37℃,溫差為57℃)極其容易造成血清產生沉澱。

3、直接放65℃水浴中更是極其殘忍的做法,是對血清的褻玩,對科學規則的粗暴踐踏!

4、血清應該在-10 ℃以下保存。若一次無法用完一瓶,應該無菌分裝,再冷凍保存。


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