三代測序技術自推出以來，憑藉其長讀長、無PCR擴增偏好性等技術優點廣泛應用到人基因組大片段結構變異檢測上，已經在癲癇、乳腺癌等疾病上廣泛應用，但由於其單鹼基錯誤率較高的特點，對於SNV和InDel的檢測一直依賴於二代短讀長測序。去年5月，PacBio公司在國內正式推出Sequel II 新一代測序系統，依賴於PacBio SMRT測序技術獨有的CCS測序模式，能夠通過滾環測序提升reads準確度，同時結合聚合酶試劑的優化，酶讀長大幅提升，在獲得高精準度HiFi reads的同時能夠保證10kb以上的插入片段讀長，將原有的CLR測序模式下鹼基精確低的問題徹底解決了。
HiFi reads（High fidelity reads）是PacBio Sequel II採用CCS模式測序產生的兼顧長讀長和高準確度的序列，其在全變異檢測和基因組組裝領域都有很大的應用價值。2019年8月Nature Biotechnology雜誌發表了1篇研究文章“Accurate circular consensus long-read sequencing improves variant detection and assembly of a human genome”[1]，該文章中利用HiFi reads完成了人參考基因組的組裝，並評估了HiFi reads對SNVs、InDel和SV的檢測能力。
研究結果表明，利用HiFi reads進行單鹼基突變和短的插入缺失變異（Indel，<50bp）檢測，並使用Google開發的DeepVariant分析流程時，PacBio對SNVs和Indel的檢測F1分數分別可以達到99.91%和95.99%。同時對SV的檢測也一直是SMRT技術的強項，檢測靈敏度和特異性都高達95%以上。
安諾基因基於Sequel II 測序平臺和最新的2.0版本測序試劑，推出三代人重全變異檢測產品，產品分析內容涵蓋SNP、InDel和SV檢測、過濾與註釋，同時也兼顧多個樣本間的差異比較分析，為人類基因組學研究助力。
三代人重全變異檢測分析路線圖
依據安諾最新的2.0試劑HiFi測序產出結果，單張SMRT Cell 平均可獲得約20Gb-24Gb左右的HiFi reads，因此測序2個SMRT Cell既可以滿足人重全變異檢測的數據需求，有效數據深度達到15X左右。
三代人重測序產品研究策略
產品優勢
一次測序輕鬆搞定SNP、InDel和SV全變異分析
採用DeepVariant、Sniffles等高分文章專業分析軟件
享受極速測序週期+雲計算快速分析
徹底解決短讀長測序高GC區域覆蓋難題
目前安諾優達配置有7臺Sequel II測序儀，全面為科研助力。去年7月，安諾優達測序實驗室榮獲PacBio官方認證測序服務商證書，實驗數據質量穩定可靠。依託強大的安諾雲分析資源和專業的生物信息團隊，安諾優達為合作伙伴提供更快速、更優質的三代測序服務。
參考文獻：
1. Wenger, Aaron & Peluso, Paul & Rowell, et al. (2019). Accurate circular consensus long-read sequencing improves variant detection and assembly of a human genome[J]. Nature Biotechnology. 37. 10.1038/s41587-019-0217-9.
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