華中農業大學動物醫學院教授何啟蓋
第27屆廣東畜牧獸醫科技大會現場
可通過病理、血清和病原學診斷檢測
對於常用的診斷技術，何啟蓋介紹，一是現場流行病學調查與診斷技術，包括：1、病例對照研究；2、隊列研究；3、類症鑑別診斷：根據疾病之間不同的流行病學特徵（發病季節發病日齡）、臨床症狀、病理變化的差異，採用排除法；4、設計調查表。
二是實驗室診斷技術，分為病理學、血清學和病原學診斷檢測技術。病理學診斷技術有病理切片 HE 染色：通過常規切片和冰凍切片等兩種方式製備切片；以及分析病變特徵（水泡變性、充血出血、梗死等）。前者用於病變觀察，後者用於熒光抗體染色等快速診斷。以及免疫組化技術：病原（抗原）在組織中的分佈。優質抗體和去除內源性酶的干擾是關鍵。
病原學檢測可進行病原分離鑑定，包括：1、細菌分離（厭氧、需氧菌、難培養的細菌；抗生素或營養缺陷型選擇性培養基）；2、病毒分離鑑定：有病變和無病變的病毒；不同毒株適應不同細胞； 3、其他分離方法：雞胚尿囊腔（或卵黃囊、絨毛尿囊膜）接種分離；4、實驗動物接種：家兔、小鼠等。
參會嘉賓聽課很認真
靶基因的保守性會影響PCR診斷敏感度
在使用試劑盒進行診斷時，何啟蓋指出，可以通過以下方面來評價，比如敏感性：從目標群體中檢出感染動物（≠發病動物）；特異性：區分感染和非感染動物；穩定性：批間變異係數低於 10%。
有些因素會影響到診斷方法的的敏感度，比如抗體檢測 ELISA是靶蛋白的保守性、純度；抗原檢測 ELISA是捕獲抗體和檢測抗體的親和力；PCR是靶基因的保守性；以及上述方法的檢測程序的優化。與穩定性有關的因素是抗原和試劑的穩定性。
瞭解診斷的要領後，還需正確應用與分析診斷結果，何啟蓋指出，診斷方法的組合有串聯或並聯（平行）試驗，是指兩種或兩種以上的診斷方法的配合應用和診斷結果的採用方式。串聯試驗能提高診斷的特異性；平行試驗能提高診斷的敏感性。具體選擇哪種試驗，可根據疾病的造成損失的嚴重程度而定。
診斷技術前景廣闊，應用將更簡便
疫病的繁雜也促進了診斷方法的升級，對於發展趨勢，何啟蓋認為會更加快速、簡便、可現場使用；可視化、定量化，與免疫評估相關；以及高通量。他介紹了建立 IFN-γ-ELISpot 方法來評價豬偽狂犬病疫苗免疫效果。通過PRV IFN-γ-ELISpot 方法與抗體檢測、攻毒保護結合，評價偽狂犬疫苗免疫程序。結果證明，弱毒疫苗與滅活疫苗組合，能產生高水平的體液免疫和細胞免疫，提供最強的保護力。
何啟蓋現場還展示了一個案例來說明診斷技術的應用：某規模化豬場新的案例發病情況：140 日齡；20多頭達到40.5C以上。對於診斷的流程，何啟蓋表示，先進行發病日齡調查，發現是生長育肥豬多發，而且急性死亡，口鼻流血，肺臟粘連。
然後再進行細菌鑑定，使用ApxIV-PCR + ApxI/II/III-PCR 的方法，確定強弱毒和血清。他指出，ApxIV-ELISA 鑑別診斷試劑盒能區分滅活疫苗免疫豬與自然感染豬；區分 ApxIV 基因缺失活疫苗、亞單位疫苗與野毒感染豬；是啟動豬傳染性胸膜肺炎的淨化方法（加拿大種豬是傳染性胸膜肺炎陰性）。
經過一系列的診斷，何啟蓋給出的處置是發病群體飲水給藥；未發病或受威脅群體進行血清特異性疫苗免疫；並消除可能的誘因，如溫度與通風。
本屆大會主辦單位：
廣東省畜牧獸醫學會
承辦單位：
南方農村報、農財寶典、新牧網，
中牧集團，
人獸共患病防控制劑國家地方聯合工程實驗室。
鉑金贊助單位：
默沙東動物保健品（上海）有限公司、
廣州市華南農大生物藥品有限公司、
金河生物科技股份有限公司；
晚宴一等獎贊助：
鶴山市墟崗黃畜牧有限公司；
金牌贊助單位：
佛山市正典生物技術有限公司、
廣州悅洋生物技術有限公司、
成都微瑞生物科技有限公司、
深圳市綠詩源生物技術有限公司、
羅氏診斷產品（上海）有限公司、
廣東旺大集團股份有限公司、
帝肯（上海）貿易有限公司、
廣東省動物防疫物資儲備中心、
勃林格殷格翰中國動物保健、
廣東永順生物製藥股份有限公司、
廣州維伯鑫生物科技有限公司；
晚宴特別鳴謝：
廣東溫氏大華農生物科技有限公司
白酒贊助：
廣東永順生物製藥股份有限公司；
紅酒贊助:
四川華神獸用生物製品有限公司。
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