关心婷
我猜你想问的是逆转录获得的的目的基因不能直接酶切的原因是什么？这个原因有以下几点
1 酶切首先需要有酶切位点，你逆转录获得的目的基因上面正常情况下是不带酶切位点的，如果你想要进行分子克隆，双酶切接入质粒中去的话，肯定没办法酶切。逆转录获得的目的基因的引物是通用引物，及oligDT，不含酶切位点的。
2 对目的基因进行双酶切的时候，必须检测一下基因内部是否含有你想用的酶的酶切位点相同的序列，如果有了，那就必须换其他酶，这一点很重要。如果没有验证，那么很有可能就将目的基因给切断了。
3 逆转录获得的目的基因体系中还有很多杂质，所以首先要对目的基因进行纯化，最常用的就是琼脂糖凝胶电泳，切下来，然后用试剂盒回收，然后再用这些模板作为进行PCR扩增！PCR扩增的目的两个:首先是扩大目的基因的含量，因为只有数量足够大，连接时候才会更容易发生。其次是用人工合成的含有合适酶切位点引物扩增，让目的基因带有酶切位点。
只有目的基因获得了，酶切位点确定了，目的基因带上了酶切位点这三点都确认了，才可以进行双酶切实验，所以刚获得的目的基因是不可以直接酶切的。
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