關心婷
我猜你想問的是逆轉錄獲得的的目的基因不能直接酶切的原因是什麼？這個原因有以下幾點
1 酶切首先需要有酶切位點，你逆轉錄獲得的目的基因上面正常情況下是不帶酶切位點的，如果你想要進行分子克隆，雙酶切接入質粒中去的話，肯定沒辦法酶切。逆轉錄獲得的目的基因的引物是通用引物，及oligDT，不含酶切位點的。
2 對目的基因進行雙酶切的時候，必須檢測一下基因內部是否含有你想用的酶的酶切位點相同的序列，如果有了，那就必須換其他酶，這一點很重要。如果沒有驗證，那麼很有可能就將目的基因給切斷了。
3 逆轉錄獲得的目的基因體系中還有很多雜質，所以首先要對目的基因進行純化，最常用的就是瓊脂糖凝膠電泳，切下來，然後用試劑盒回收，然後再用這些模板作為進行PCR擴增！PCR擴增的目的兩個:首先是擴大目的基因的含量，因為只有數量足夠大，連接時候才會更容易發生。其次是用人工合成的含有合適酶切位點引物擴增，讓目的基因帶有酶切位點。
只有目的基因獲得了，酶切位點確定了，目的基因帶上了酶切位點這三點都確認了，才可以進行雙酶切實驗，所以剛獲得的目的基因是不可以直接酶切的。
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