检测在生物安全防控和定点清除中的作用毋庸置疑。部分养殖集团已经建立了由中心实验室、区域实验室和快检实验室为基础的监测响应机制。部分规模化猪场也配备了荧光定量PCR检测仪，可开展外围生物安全监控，在定点清除中通过就近检测也满足了对检测时限的要求。但通过考察发现，检测体系与养殖一线的协同仍刚刚起步，缺少科学合理的采样方案，导致过度检测耗费检测资源就是其突出的表现。
一、过度检测产生的问题
常见现象一：
平时风平浪静，样品量少，实验室检测结果相对准确。一有风吹草动，生产体系即开始全群采样排查。检测人员加班加点对样本进行检测，一段时间内有可能出现多份样本可疑。对可疑样本换试剂盒复检，可能又呈现阴性反复。
主要原因有：
（1）没有根据统计学要求、猪群分布特点和疾病传播特点制定采样方案，导致样本量过大，检测量超出了实验室承载能力；
（2）实验室中缺少清除气溶胶的基础设施，阳性对照或阳性样本产生的气溶胶导致后续样本的假阳性，尤其是在针对过量样本时，更易产生失误。
常见现象二：
生产体系按周为节律对猪群筛检，以求对病原早发现。多个养殖场产生大量样品，采样和检测人员多班倒。猪场一旦真正发病，往往多点发病。
主要原因有：
没有根据危险级别对应制定采样方案，“体检”的频率过高，采样工作强度大，容易在采样过程中对生物安全执行不到位，造成交叉污染。
二、如何科学采样，让资源合理配置？
（1）首先需明确责任主体，负责检测方案的制定和与检测中心的协调
检测工作应由了解猪场猪舍布局和情况的兽医（生产型兽医）发起，并由检测中心负责人根据样品检出情况与驻场兽医共同制定下一阶段的采样。明确责任主体让专业的人负责制定检测方案，不但可以保证检测结果更加可靠，也能通过样本的科学分布确定最小的排查范围，这是节省人力、物力，发挥检测最大效能的前提。
（2）监测有侧重点，制定不同场景下的监测与检测预案
监测和检测的频率与风险等级密切相关，需建立根据风险等级的检测联动机制。
1）在风险等级较低时，日常监测的重点是车辆、人员、物资等来自外部的威胁，可定期对猪场周边的环境进行定期的排查，如在春节期间，针对周边有杀“年猪”的情况出现时，就要对环境进行采样检测，对进出猪场的车辆、物资和人员自然要加大检测的强度。当周边出现死猪时，地表水的检测也要加强检测。
2）当周边环境中或人流、物流、车流中检出频次增加时，表明猪场面临的风险在增强。除增加消毒频次外，可加大针对猪场内环境的检测力度。可对粉尘、水源、道路、污水池、工具、衣物等区域增加检测频次，以督促生物安全制度的落实。
3）全部猪群的排查工作不宜过频，以异常猪群的监测为主
猪越来越金贵，猪场希望通过逐头检测尽可能减少冤杀猪的想法无可厚非。但有些猪场以7天为节律进行猪群排查，采样多，随之而来会造成检测任务重，检测过程中难免出现交叉污染等问题。
对于猪群普查的启动要以猪场的风险等级为参考依据，当在外围出现多起车辆或人员检出阳性时或进出人员频次较大时，兽医团队以唾液棉绳等群体采集的方式可减少样本量，辅助以猪栏、料槽等环境样本可以排查地更为彻底。随着非瘟潜伏期的延长，除了核酸检测外还可以结合抗体监测进行普查，抗体监测可每年监测2~3次。
4）对猪群日常监测，以异常猪的检测长抓不懈
规模化往往从妊娠母猪最早开始发病，针对妊娠母猪只要发现剩料的就要立即进行唾液采样进行确诊。针对育肥猪中的异常猪，对于皮肤发红、精神状态不佳、喜卧的猪可通过唾液、鼻腔液或直肠拭子进行采样确诊。
（3）启动定点清除前先应确定感染范围，可显著降低采样量
大多数猪场进行定点的清除时，对猪逐头检测后再对感染猪进行清除，这在时间上有所延迟，人员操作上也可能存在交叉传播的风险。可先根据猪场猪舍分布，以单元格原理，分区域对异常猪和环境进行采样，先确定风险的范围后再清除将会更加高效。建议采取以下步骤进行操作：
1）发现阳性猪后，先按预定的清除路线将感染猪移出猪舍。剔除过程中仍需对剔除的每头猪进行采样，检测感染比例和病毒载量（此数据可作为对周边猪群处理或监测的依据）
2）当确诊后，对送检不便的猪场，可以临床症状为依据（而不是等检测结果后再淘汰，以避免丧失处置时机），对凡是减料不食的猪进行先剔除，但在剔除过程中仍需对这些猪进行采样送检，以数据做为后续淘汰力度的依据。
3）以检出阳性点为圆心，对周边栏的人员和物资通道进行环境采样检测，对异常猪只进行采样检测，从而确定有几栋猪舍发病或可能感染的危险区。对人员交叉情况进行分析，确定监控区（连续监控至少一个月）。在监控区内开展监测与排查，有利于保持猪群的静默状态；
4）对风险区内检测呈阳性的猪只进行剔除，以时间轴线和病毒载量纬度评价疫情控制的趋势，决定后续淘汰和剔除的力度；
5）猪群连续28天没有再检出阳性个体后，仍持续对环境样本（尤其是污水池等区域）监测一个月，以监督生物安全措施的落实。
三、如何提高检测结果的可靠性？
（1）采样流程的培训和相关装备的配备是结果可靠的前提
除对一线兽医的采样的流程SOP培训之外，需配备必要的采样工具、消毒和防护措施，从而降低交叉污染的可能。对于样本的保存也需要配置必要的工具，如唾液样本容易被降解，采样配冰盒、配置样品保存液，运输过程中配备专用的保温箱都是保证结果可靠性的前提。采样过程中最好设置双人，有专人记录保证样品信息准确，并互相监督，保证采样信息的准确。
（2）以可靠样本进行确诊是启动定点清除的核心
确诊仍是第一要务，在此笔者并不是否认唾液或鼻拭子在提前发现传染源中的作用，但在从未发生过非洲猪瘟的猪场中，仅仅通过唾液中检出弱阳性就启动定点清除工作，仍是有待商榷的，因为存在误诊的可能性（如样本丰度不高、存在着受环境污染的可能性）。
出现上述情况后，本着宁可信其有的观点，可以先对异常猪进行清除，但还要对这些移出猪场的猪进行血拭子采血确诊。采用血拭子检测的风险性相对较小，一方面非洲猪瘟感染早期不会出现凝血不良，此外血拭子采集的方法出血量是可控的，不会造成大面积污染。病毒在血拭子中受外界干扰少、病毒载量高、更可靠。
（3）养殖集团应建设标准化的中心实验室
荧光定量PCR非常敏感，容易受到气溶胶的干扰，导致结果出现可疑或假阳性，可靠的硬件设施是结果准确的保障。养殖集团可参照2002年国家卫生部颁布的《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》建设实验室。其中PCR实验室应该由四分区组成，四分区有独立通风和空调系统，设定缓冲区和气压流向更有助于降低实验室上游污染的概率。养殖集团的中心实验室可作为仲裁机构，对结果进行最终的确认，有以便于更科学地决策。
（4）基层实验室或区域实验室可通过通风设施降低气溶胶污染
1）实验室设计按试剂配制区、样本制备区、PCR扩增区进行物理性分区，每个区域都要保障独立通风，对于PCR扩增区更需要设置大功率排风扇不断运行将气溶胶排出试验区域。
2）加样和试剂配制需在生物安全柜里完成（非超净工作台，超净工作台仍然是气体内循环的，不能有效清除气溶胶）；
3）夜晚时实验室需保持密闭状态，用紫外灯产生的臭氧消除核酸污染；
4）实验室表面需定期消毒，除紫外线照射外，可用氯制剂对表面消毒，用84消毒液对地面进行核酸清除；
5）移液器、离心机均可用稀释后浓度为30%的84消毒液清理（清理后迅速用清水反复擦干净）；
6）选择有内参的检测试剂，可通过内参曲线监控基层操作人员的操作是否规范，此外内参的Ct值及曲线可反馈PCR反应的效率，可降低由于样本抑制PCR反应但被误判为阴性的概率。除此之外，内参的作用可确定反应是否正产进行，有替代阳性对照的作用，降低阳性对照引起的污染风险（注：阳性对照主要为了监测PCR反应体系是否正常反应，最大可能是DNA聚合酶失效、引物和探针的失效等，引物和探针的失效时间与内参引物和探针的时间几乎是同步的，因此内参是可以替代阳性对照的部分功能的）；
7）实验室需准备2~3种试剂盒，一旦疑似假阳性时，可用另一种试剂盒进行复核。如确定存在PCR产物气溶胶污染时，可用后一种试剂盒继续检测（因两种试剂盒引物和探针不同，前一种试剂PCR形成的气溶胶不会影响另一种检测试剂的检测结果）。
四、小结：
过度检测是对检测资源的浪费，日常监测应重点在外围监测和对异常猪的确诊上。即使是在紧急情况下，也需要专业人员在了解猪场现状的前提下，根据统计学制定相应的检测方案，采取合理的样本发挥检测的效能。
为了保证检测结果的可靠，兽医应加大对基层采样人员的采样流程培训和监督考核，让生产体系和检测体系形成合力。在硬件设施上，建设标准化PCR实验室是降低污染的基础，养殖集团需要建设高标准的中心实验室做为终评机构。
相信在2020年我们必然在非洲猪瘟防控体系上更上一层楼，养殖集团会以检测数据为基础，更为合理地进行风险预警与猪群排查，在定点清除中的方案会更精准、更有效、损失最小，这需要检测中心将数据统计和临床工作相衔接，这更需要两个体系深度的融合。坚信中国养殖人的聪明才智和不懈努力，最终能战胜非洲猪瘟。
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