AD的两个主要病理特征是淀粉样蛋白（Aβ）斑块和高磷酸化tau蛋白诱导的神经原纤维缠结。近年来，越来越多的研究表明，包括miRNA在内的表观遗传因素通过调控基因表达、Aβ产生和tau磷酸化而参与AD发病过程。先前的研究发现，在小鼠中miR-369可通过靶向N钙粘着蛋白的表达来促进大脑发育，且miR-369在神经元分化和迁移中也起一定作用为了证明miR-369在AD发病机理中的作用。本研究应用miR-369基因敲除的3xTg-AD小鼠，研究了miR-369的缺失对其认知功能和tau病理的影响，以及miR-369对Fyn和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2（SRPK2）的调控作用。
miR-369敲除加剧了AD小鼠的认知障碍
miR-369KO/AD小鼠在Morris水迷宫（MWM）测试中的逃避潜伏期显着增加，穿过目标平台的数目显着减少；在Barnes迷宫中，寻找目标的错误次数更多，耗费时间也更长，表明其学习能力显著受损。
图1 miR-369KO/AD小鼠的行为学表现
miR-369敲除促进AD小鼠的Tau蛋白过度磷酸化和Fyn和SRPK2的上调
miR-369KO/AD小鼠的大脑皮质、海马、小脑和纹状体中的成熟（功能性）miR-369表达完全丧失。尽管MAPT基因（编码tau蛋白）和总tau蛋白表达均未改变，但其大脑皮层组织Ser214和Tyr18位点tau蛋白的磷酸化水平增加。此外，miR-369KO/AD小鼠脑中Fyn和SRPK2的水平均显着增加。
图2 miR-369KO/AD小鼠p-tau、Fyn和SRPK2表达
miR-369的恢复逆转了miR-369KO/AD小鼠脑中Tau的过度磷酸化以及Fyn和SRPK2的上调
通过向miR-369KO/AD小鼠脑室内注射miR-369质粒，3个月后收集小鼠大脑皮层组织，实时定量PCR结果显示其miR-369的表达明显上调。注射miR-369后，大脑皮层Fyn和SRPK2蛋白的表达水平以及tau蛋白Ser214和Tyr18位点的磷酸化水平降低，总tau蛋白表达未见明显变化。
miR-369靶向Fyn和SRPK2
基于TargetScan网站发现Fyn和SRPK2均可以作为miR-369的靶基因。因此，作者通过转染报告基因构建体在293T细胞中进行了荧光素酶分析。结果表明，miR-369能够靶向结合Fyn和SRPK2并抑制其表达水平。
图3 萤光素酶测定miR-369的靶基因
总结
Tau蛋白的过度磷酸化是AD的重要发生机制之一，其限制了轴突的正常传递、促使神经原纤维缠结形成，并诱导了神经元细胞的死亡。Fyn是Src家族的非受体酪氨酸激酶，而SRPK2是一种细胞周期调节激酶，二者均已被证明与AD发病过程中tau蛋白的过度磷酸化有关。本研究证实了miR-369的缺失会引起 Fyn和SRPK2活性上调，从而促进tau磷酸化；而提高miR-369水平可能是AD治疗研究的一种潜在选择。
参考文献：
YAO X, XIAN X, FANG M, et al. Loss of miR-369 Promotes Tau Phosphorylation by Targeting the Fyn and Serine/Threonine-Protein Kinase 2 Signaling Pathways in Alzheimer’s Disease Mice [J].
编译作者：乐行僧 (Brainnews创作团队)
校审：Victoria, Simon (Brainnews编辑部)
