消毒和滅菌是微生物實驗技術中最基本的操作技術，從業人員均應瞭解消毒和滅菌的基本概念、兩者的關係，各自的應用方法及其意義，操作時應嚴格執行相關的操作規程，一方面確保生產與檢驗工作的效果，另一方面也是對自身安全的保護。
消毒和滅菌的概念：
1、消毒：指對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物，因此消毒是不徹底的，不能代替滅菌。凡用於消毒的化學藥品稱為消毒劑，因此人們也常稱消毒劑為化學消毒劑。
2、滅菌：殺滅物體中所有活的微生物（含芽孢）的作用，滅菌是採用強烈的理化因素使任何物體內外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。通常用物理方法來達到滅菌的目的。
二、消毒和滅菌的關係
1、共性：殺滅微生物以控制其汙染和防止傳播。
2、區別：
消毒滅菌方法
目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法 (如干熱滅菌法、溼熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等) 和
化學方法 (消毒劑、抗生素) 兩大類。1.乾熱滅菌法
乾熱滅菌法是利用恆溫乾燥箱內120ºC~150ºC的高熱，並保持90~120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。
主要適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。
酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬於乾熱滅菌的方法之一。在進行動物細胞體外培養工作時，常須利用工作臺面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進行補充滅菌。
2.溼熱滅菌法
壓力蒸汽溼熱滅菌法是目前最常用的一種滅菌方法。
它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質凝固變性而使微生物死亡。
適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養液的滅菌。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調整為1.0～1.1kg/cm2，維持20～30min即可達到滅菌效果。
3.射線滅菌法
利用紫外線燈進行照射滅菌的方法。
紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機制是通過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅活。
適合於實驗室空氣、地面、操作檯面滅菌。滅菌時間為30min。用紫外線殺菌時應注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會產生不良影響。
4.過濾除菌法
過濾除菌法是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大於濾膜孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。
過濾除菌法大多用於遇熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養液等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌。濾膜孔徑應在0.22～0.45μm範圍內或用更小的細菌濾膜，溶液通過濾膜後，細菌和孢子等因大於濾膜孔徑而被阻，並利用濾膜的吸附作用，阻制小於濾膜孔徑的細菌透過。
5.化學消毒劑消毒法
化學消毒劑消毒法用於那些不能利用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實驗器皿等。
1）消毒劑分類
依殺滅微生物能力進行分類，有以下三種：
2）消毒劑的選擇
消毒劑的種類很多，性質不一，因此應根據實際需求選擇既安全又有效的消毒劑。在選擇時至少應考慮以下幾點：
3）消毒劑的使用
A、影響消毒效果的因素
影響消毒劑效能的因素比較複雜，一般都因消毒劑的種類而異，因此各種消毒劑使用時應注意以下因素
a）微生物種類及數量
消毒劑的有效濃度及作用時間因微生物的種類及數量的不同而有差異，不同類型的病原微生物對消毒劑的抗力不同。對於細菌繁殖體來說，革蘭氏陰性菌比革蘭氏陽性菌對消毒劑的耐受性強，尤其是銅綠假單胞菌的耐受性較強；
芽孢的耐受力最強，在化學消毒劑中，戊二醛和過氧化氫可殺滅芽孢；
病毒對消毒因子的耐力也因其種類的不同而有相當大的差異，親水病毒的耐力較親脂病毒要強；
真菌對大多數化學藥物的耐受力較強，因此適用於細菌的消毒劑並不一定適用於真菌，但真菌一般耐熱性較差。微生物汙染數量多時，應加長消毒接觸時間、加大消毒劑用量或提高消毒劑濃度。
b）溫度
一般來說，消毒的速度隨溫度的提高而加快，其殺菌作用也相應增強。溫度影響的原理是其可影響菌體表面和酶系統的活性，以及消毒劑的分子運動，使得消毒劑與菌細胞接觸的機會增加，從而使消毒的時間縮短。但溫度的變化對各種消毒劑的影響不同，如醇類和酚類一般受溫度影響較小，但如甲醛、環氧乙烷等溫度升高一倍時，其殺菌效果可增加十倍。
c）濃度
消毒劑的濃度應考慮的是其主要成分的濃度，根據不同類型的消毒劑性質，提高或降低濃度，均可顯著影響消毒效果。一般降低消毒劑的濃度需延長相應的消毒時間，且消毒劑內的有效成分在其保存期內也會相應下降。
d）pH值
酸鹼度常影響酸性或鹼性消毒劑的電離度，改變其溶解度及分子結構，影響不同離子型消毒劑的作用，在鹼性環境中，細菌表面負電荷增多，陽離子型消毒劑作用較強，在酸性環境中，細菌表面負電荷減少，陰離子型消毒劑的殺菌效果較好；另外pH的過高或過低對微生物的生長及表面物理化學狀態均有影響。
e）有機物質
消毒環境中存在有機物，則其可在微生物表面形成保護層阻礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，可能導致微生物逐漸產生對藥物的適應性，這些情況均會不同程度的降低消毒劑的消毒作用，如有機物可中和一部分消毒劑，有機物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。
B、其他注意點
a）微生物對消毒劑的耐受性
一般來說，為了避免微生物對消毒劑的耐受性，很多企業的消毒劑是輪換使用的，現今在學術界對於消毒劑的輪換使用的必要性尚存爭議，但FDA的監管引文中主導應進行消毒劑輪換，但消毒劑的輪換使用週期應以歷史環境監測數據為基礎制訂。
微生物對消毒劑的耐受性較抗生素要低一些，因為消毒劑比抗生素有更強的殺菌作用。另外使用高濃度的消毒劑來殺滅少量的微生物通常影響不大，因此應考慮選擇合適的消毒劑來對抗不斷增強的耐受性。同時建議定期進行試驗證明或評估從環境菌監測中分離出的微生物（含已知及新的類型）對該環境使用消毒劑的敏感性。
b）規範及安全使用
在消毒劑的使用過程中，人員培訓及是否規範及安全使用該消毒劑對其應用有很大影響。
接觸消毒劑的人員要求進行微生物、清潔滅菌操作、消毒劑的製備/使用/安全處理廢棄稀釋及濃縮消毒劑的培訓。
如正確配製消毒劑是關鍵，很多消毒效果不佳或失敗的例子源於消毒劑的過度稀釋，另外用於無菌操作流程的消毒劑必須用無菌水稀釋，一般稀釋用水推薦純化水及更高級別的水，因為水的硬度會影響一些消毒劑的功效。
另外在處理可能產生有毒刺激性氣體、腐蝕性較強及濃度較大的消毒劑（如殺孢子劑）時，應配備適宜的安全防護裝備，如安全眼鏡、面罩、過濾氣味的口罩、手套、防護服等。
在消毒劑的使用同時應考慮清潔劑的配合使用，清潔是去除表面顆粒及微生物、去除殘留並提高後續消毒效果，因此清潔是為後續的消毒做好準備，同時規避前後2種輪換消毒劑的互相作用。
