1、原理
試樣進行抽提和稀釋，加人內標物，用高效液相色譜儀分離，再用紫外檢測器測定香蘭素的含量。
2、試劑
分析純試劑、蒸餾水、去離子水或相等純度的水。
乙醇：95% (體積分數)。
甲醇：色譜純
磷酸溶液: 0.01 mol/L,
流動相:用25份甲醇與75份稀磷酸混合。用膜過濾、脫氣。
香蘭素(4-經基一3一甲氧基苯甲醛)對照標樣：純度大於99% .
內標物:乙酞水楊酸，純度大於99% 。
3、香蘭素儲備液:
稱取一定量的香蘭素,精確至0.001g。用流動相配製成為濃度為1g/L的標準儲備液。
4、工作溶液
用流動相稀釋儲備液，獲得工作溶液。香蘭素工作溶液濃度為0.1gL，可在4℃下暗處保存不超過10 天。
5、內標物溶液
將乙酞水楊酸溶解於流動相中，使其濃度為0.6 g/L，稱量時精確至0.001 g。
注: 內標濃度應與樣品溶液中香蘭素濃度基本一致.
6、儀器
氣密研磨器。
單標容量瓶，容量為100 mL 和200 mL。
過濾膜，孔徑為0.45um 。
連續型索氏抽提儀，由下列部件組成。
連續型索氏抽提儀：125 mL 索氏抽提器。
冷凝器。
250 mL 磨口燒瓶。
熱源:帶有滑動變阻器或其他控熱方式的電熱套或油浴。
高效液相色譜儀:配紫外檢測器;
色譜柱:C18，硅膠柱，5um - 10um 粒徑。
注射器:用於高效液相色譜儀。
分析天平：精確度為0.001 g.
7、試樣的製備
將樣品(香草蘭豆莢、切段或香草蘭粉)研磨並使之充分混勻。稱20g已製備好的樣品，準確至0. 001g,在抽提儀器中用大約200 mL 乙醇抽提試樣16h，即溶劑進行25次~ 30 次循環。
每100g 豆莢用1L溶劑抽提。將抽提物轉移至一個 200mL的容量瓶中。用少量的乙醇清洗抽提儀器中的燒瓶數次，並將洗出液加人容量瓶中，乙醇定容並混合均勻。用流動相稀釋該溶液 10 倍。
8、分析步驟
流動相流速大約為 1 mL/min，室溫進行分析。
用 10 mL 內標物與10 mL 根據製備的樣品溶液混合。用膜過濾。待測定的物質的質量用式(2)計算:
( 2 )
注: 式中的峰高可由其峰面積代替
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