1. 目的：为了规范免疫组化染色过程中各步骤的规范化操作，以期获得免疫组化结果的标准化，特制定本规范
2. 范围：适用于本科室免疫组化实验室进行的所有免疫组化检测；
3. 权责：
3.1 本科室病理医生根据诊断需要申请免疫组化检测项目，在技术员完成染色后判读结果；
3.2 免疫组化室技术员根据病理医生申请的项目完成免疫组化的染色工作；
4. 定义：免疫组织化学是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织呈色反应,借助可见的标记物,对相应的抗原或抗体进行定位,定性和定量检测的一种免疫检测方法；
5. 作业内容：
5.1 取材、固定、组织处理：参照《常规制片质量管理制度》；
5.2 诊断医生电子申请免疫组化，组化室技术员核对并提交档案室准备所需蜡块，预先把标记及病理号记录于载玻片上；
5.3 切片：切片厚度3-4um，采用阳离子玻片捞片，60°温箱烘烤过夜；脱蜡步骤参照《常规制片质量管理制度》；
5.4 抗原修复：采用热修复法，具体步骤如下：
5.4.1 在盛装PH6.0柠檬酸缓冲液的电饭锅内放入切片；
5.4.2 煮沸；
5.4.3 保温30分钟，自然冷却；
5.5 染色方法：采用EnVision二步法
5.5.1 PBS冲洗，3*5分钟
5.5.2 滴加3%的H2O2阻断内源性过氧化物酶，室温孵育5-10分钟
5.5.3 PBS冲洗，3*5分钟
5.5.4 一抗室温孵育60分钟
5.5.5 PBS冲洗，3*5分钟
5.5.6 EnVison二抗室温孵育30分钟
5.5.7 PBS冲洗，3*5分钟
5.5.8 DAB显色，光镜下控制
5.5.9 蒸馏水冲洗终止显色，苏木素复染；
5.5.10 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固；
5.6 核对：完成的片子贴上标签，按开单医生归类并交于医生，在电脑上做记录。
5.7 质控对照：相关的阳性对照切片显示阳性结果，阴性对照显示阴性结果，判定染色质量合格。
5.7.1 阳性对照：每张切片均设阳性对照片，在需检测的组织切片上端附贴已知阳性组织片，阳性对照结果为阳性；
5.7.2 阴性对照：由组织切片内对照完成，检测结果为阴性；
5.8 抗体的保存：所有第一抗体及检测二抗系统均保存于4°冰箱；在抗体的有效使用期内使用。
2020.03
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