溼熱滅菌法是最常用的滅菌法，效果較好。在同一溫度下溼熱滅菌的效力比干熱滅菌的效力強。常用的溼熱滅菌法有巴氏消毒法、煮沸消毒法、流通蒸汽消毒法、間歇滅菌法及高壓蒸汽滅菌法。在實際工作中所採用的不同消毒、滅菌法是根據不同的要求、不同的對象而採取的。
1）巴氏消毒法：由巴斯德首創的利用熱力殺死液體中的病原菌和一般雜菌，同時又不致嚴重損害消毒物的質量的方法。常用於乳製品的消毒。
具體的消毒方法有兩種：61.1℃～62.8℃消毒30分鐘；71.7℃消毒15～30秒。目前使用後一種方法較多。
2）煮沸消毒法：煮沸5分鐘，可殺滅所有的細菌繁殖體，一般消毒以煮沸10分鐘為宜。但殺死芽孢則需1至數小時。如果在水中加入1% Na2CO3則可提高沸點（105℃），增強殺滅芽孢的作用，同時又可防止金屬器械生鏽。如在水中加入2%～5%石炭酸，則10～15分鐘後即可破壞芽孢，所以許多醫療器械，如手術刀、剪、鑷子、膠管、玻璃注射器等，常用煮沸消毒。
3）流通蒸汽滅菌法：利用常壓下100℃的水蒸氣進行消毒。用阿諾滅菌器或普通蒸籠進行。因在正常大氣壓下，故溫度不會超過100℃。普通細菌的繁殖體15～30分鐘可殺死，而芽孢常不易被消滅。
4）間歇滅菌法：利用反覆多次的流通蒸汽加熱，殺滅所有微生物，包括芽孢的方法。有些物質不能加熱至100℃以上，為了消滅其中的細菌芽孢，需用間歇滅菌法。方法是用阿諾滅菌器或用蒸籠加熱100℃維持30分鐘，每天進行一次，連續3天。第一次加熱後，細菌的繁殖體即被殺滅，而芽孢還存活。為了使芽孢發育成繁殖體，將被滅菌的物品取出，放在室溫或37℃溫箱內過夜，第二天再加熱一次，則可殺死由芽孢生成的繁殖體。為了達到徹底滅菌，照上法再進行第三次加熱，這樣所有的芽孢將被殺滅。
5）高壓蒸汽滅菌法：高壓蒸汽滅菌法是目前最常用的有效方法。其原理是在排除冷空氣的密閉條件下，蒸汽壓力越大則容器內的溫度越高，殺菌力越強。當蒸汽壓達到0.103MPa/cm2即15磅時，溫度可達121.3℃，在此溫度下延續20分鐘即可殺死所有細菌的芽孢。
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