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无菌采取心血、胸水、腹水、十二脂肠和空肠内容物，肺、肝、脾、肾等脏器制作抹片，经革兰染色可见革兰染色阳性，两端钝圆的单个或双个杆菌。
十二指肠、空肠内容物在80℃水浴加热30min后，分别接种于肉肝汤和肉肝胃膜汤中，37℃培养4h，开始出现小气泡，18h后大量的气体将试管中固体石蜡冲至试管顶部，培养基均匀混浊，由橙色变黄，肝片不变黑而呈肉红色。血平板接种，厌氧培养48h，形成钮扣状菌落β型溶血。
生化试验：C型产气荚膜梭菌对糖的分解能力极强，能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、山梨醇、.甘油等，能使其产酸产气，不分解菌糖，不形成靛基质。接种牛乳培养基37℃培养8- 10h后，分解乳糖并产酸。
2、毒力试验
由于此病是毒血症，从肠道中检出C型魏氏梭菌尚嫌不够，必须进行毒素检查。
①泡沫肝试验取分离菌肉汤培养物3mL给家兔静脉注射lh后将兔处死，放37 ℃恒温8h，剖检，见肝脏充满气体，出现泡沫肝现象。镜检肝，可见大革兰阳性菌，其荚膜清晰浓染。
②肠毒素试验采取刚死亡的急性病猪的空肠内容物或腹腔积液，加等量生理盐水搅拌均匀后，3OOOr/min离心30-60min，上清液经细菌滤器过滤，取滤液静脉注射体重18-22g的小鼠5只，每只注射0.2-0.5mL，同时以上述滤液与C型产气荚膜梭菌抗毒素混合，作用40min后，注射于另一组小鼠，以作对照。如注射滤液的一组小鼠迅速死亡，而对照组不死，则可确诊为本病。
仔猪梭菌性肠炎的诊治误区
在诊治本病的过程中，要注意其与其它类似病症的区分，避免误诊误治。
注意：
1.A型产气荚膜梭菌引起的病仔猪，症状基本与C型所致病仔猪相似。
2.不同之处是仅50%左右的发病仔猪拉稀，而拉血色稀便仔猪更为少见，粪便颜色为灰黄、橘黄色、紫红色不等，易误认为是仔猪黄痢。
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