王穉登為江蘇江陰人，移居蘇州，據說他“四歲能屬對，六歲便能寫擘窠大字，十歲能詩，長益才氣駿發”，曾入衡山門，受其薰陶，詩文書法有一定影響，博學多藝，名滿吳會。尤其在詩文方面，頗為當世推重。他的詩歌頗有才情，七律、五律、歌賦都很在行，詩風近“公安派”。《萬曆野獲編》雲：“近年詞客寥落，惟百巍然魯靈光，其詩纖秀，為人所愛。”他以個人風貌點綴於明代詩歌史上，“主詞翰之席者三十餘年”，連睥睨不可一世的王世貞在《州山人稿》中亦說“百詩取獨詣，婉盡人巧俏絕”。嘉靖末入太學，萬曆時曾召修國史，未赴，以布衣終生。他一生著述頗豐，僅《中國叢書綜錄》所列其個人集子就有二十種之多，其中以《吳郡丹青志》最為有名，其主要作品大多收在《王百全集》中。
明代中期，活躍於江、浙一帶尤其是蘇州地區的吳門派，在書法上也盛極一時，當時便有“天下書法歸吾吳”（王世貞《藝苑卮言》）之說。在文徵明門生中，王寵、陳淳、彭年、朱朗、陸師道、錢、周天球、陸治、居節、王穉登等最著名。殆至嘉靖晚期及萬曆以後，文徵明等書壇巨擘相繼離世，吳門派逐漸失去昔日的輝煌，在此情況下，王穉登及其餘緒，“振華啟秀，噓枯吹生”。他處在兩代青黃不接之時，順理成章地遙接了文徵明的衣缽，周天球繼領吳中書畫，王穉登主詞翰之席三十年之久。
世傳王穉登以隸書聞名於世，但流傳於世的書跡多為行書、行楷書、行草書等，篆隸極為罕見。他的書法由宋元上追晉唐，在“二王”範圍內活動，他在繼承傳統用筆結字、章法佈局的基礎上，臨寫各家，融會己意，形成自己的風格，兼工各體，造詣深厚。
王穉登《行書秋聲賦卷》（廣東省博物館藏）
王穉登 1588年作，行書。
王穉登 《行書丁亥初度條幅》，臺灣何創時書法藝術館藏。
王穉登 立軸
王穉登 扇面 書法
王穉登《義興雜詩冊》為紙本，縱24.8釐米、橫15.2釐米，湖北省博物館館藏。
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