彗星实验步骤

今天小艾给大家带来“艾”学习的主题是——彗星分析，看在小编辛苦整理的份儿上，请一定一定看完哈~

生命科学界的“彗星雨”

彗星实验（Comet assay）也被称为单细胞凝胶电泳实验（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的技术。

如果DNA没有损伤，则将停留在原位，染色后呈圆形的荧光团，无拖尾出现。如果DNA受损，断裂的碎片进入到凝胶中，在电场的作用下，DNA碎片离开原位向阳极迁移，形成拖尾。

DNA受损越严重，断裂越多，产生的碎片就越多、越小，则向阳极迁移的DNA碎片量就越多，迁移距离也越长，荧光染色后就能看见“彗星”样尾长并且荧光强度增强。

两种常见的彗星实验检测方式

碱性处理&中性处理：

①Alkaline CometAssay：在碱性处理条件下，DNA发生变性，因而可检测包括单链及双链断裂在内的所有DNA 损伤；

②

靠谱的彗星分析试剂盒

CometAssay®彗星分析试剂盒（4250-050-k）

独特的优势：

1、彗星分析的开创者，众多文章验证。

2、多种彗星玻片样式可供选择；

3、提供了中性彗星分析和碱性彗星分析的试剂配制方案；

4、配合Trevigen彗星分析电泳系统能获取最佳的分析效果；

彗星实验步骤

1. 制备单细胞悬浮液，在 37℃ 条件下，悬浮液与低熔点琼脂糖（LM琼脂糖）混合；

2. 将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上；

3. 4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜，裂解液由去垢剂及高盐溶液组成，可去除多余的细胞膜及组蛋白；

4. 将载玻片浸入电泳溶液中；

5. 进行凝胶电泳，随后，中和载玻片，待LM琼脂糖完全干燥后，用荧光染料染色，并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。

除荧光染色外，彗星分析可用银染

CometAssay® 彗星分析银染试剂盒（4251-050-K）设计用于对彗星分析或单细胞凝胶电泳的样本进行简便的银染。

普通的彗星分析及荧光染色产生的数据结果需要荧光显微镜进行观察，而使用银染试剂盒则可永久记录并且在普通显微镜下检测即可。

该银染试剂盒特别设计用于降低彗星玻片使用时产生的背景以及染色颗粒硝酸银产生的毒害性。非常适合将彗星分析的图像结果永久保留并方便即时观察。

彗星分析专用电泳槽（4250-050-ES）

CometAssay®彗星电泳检测系统具有如下独特的优势：

1、通过独立的冷却水槽和恒温玻璃板以维持恒定的缓冲温度，确保实验条件过程中环境因素的稳定；

2、整个系统均使用烟灰色的高强度材料设计，可以有效避免样品遭受背景光线对DNA的破坏，且经久耐用；

3、支持2/20/96孔等多样化的检测方式，并提供配套的试剂和耗材，可以同时进行多种类型的实验；

4、提供精确和人性化的结构设计，在高架滑动托盘上的丙烯酸覆盖层，保持了最佳的DNA迁移缓冲高度；

5、全球首个单细胞凝胶电泳（彗星分析）实验的专用电泳系统；

6、亦可以用于普通常规的电泳实验，实用性强

彗星专用玻片（4250-050-03）

很多用户都尝试过通过铺两层胶，自己来做彗星实验的玻片，但最终都因为脱片的问题严重，而选择了小艾推荐的专用玻片，结果不言而喻：

Trevigen的彗星分析专用玻片是经过特别处理，具有疏水性同时又能与彗星分析琼脂有很好粘附的表面，非常适合用于彗星分析。同时提供2孔、20孔和96孔不同样式。

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