雞傳染性鼻炎是當前危害我國養雞業較為嚴重的細菌性傳染病之一 ，是由副雞禽桿菌引起雞的一種急性呼吸道疾病，以鼻、竇黏膜及眼結膜發炎，臨床表現為流涕、噴嚏、流淚及眶下竇腫脹、臉部水腫為特徵。
副雞禽桿菌為革蘭氏染色陰性細小球杆菌、兩極濃染、不形成芽孢、無鞭毛和無運動性，有形成鏈狀的趨勢。通常分為A、B、C三個血清型，每個血清型又分若干亞型，其中A型包括A-1、A-2、A-3、A-4四個亞型，C 型包括C-1 、C-2 、C-3 、C-4 四個亞型，B型目前只有 B-1一個亞型，各個血清型均能致病，但不同的菌株毒力和免疫原性會有差別。
分離菌株鑑定
一、病原的分離
取病雞的雞頭，用手術刀燒熱後，灼燙眶下竇表面，然後手術刀灼燒冷卻後切開眶下竇，用無菌棉籤取粘液，接種 TSA培養基（8%雞血清+0.01%NAD+）37℃ CO2 培養箱或厭氧罐中培養16-24h。
二、鑑定
1、疑似菌落的培養
從培養板上刮取疑似副雞禽桿菌菌落加入 2mlTSB 培養基（8%雞血清+ 0.01% NAD+）中 37℃160rpm 震搖 8-10h。
2、革蘭氏染色
先通過鏡檢初步判定分離菌落是否為副雞禽桿菌，副雞禽桿菌革蘭氏染色可見革蘭氏染色陰性，多呈球杆菌，營養條件合適時多數是啞鈴狀的，大小1.5um×0.3um-0.4um，多單個存在，也有短鏈排列。
3、PCR鑑定
取刮取可疑菌落（可以刮取一片區域）進行PCR鑑定。根據APG的全基因序列設計了一對PCR引物：副雞禽桿菌陽性病料會在527bp處呈現條帶。
引物由上海生工生物合成，保存濃度為100 umol/L，工作濃度為20 umol/L，-20℃保存備用。
副雞禽桿菌16SrRNA基因PCR的反應條件為：95℃變性10min；然後進入30個循環，94℃ 1min；65℃ 30s；72℃ 30 s；最後72 ℃延伸5 min，4℃終止反應。擴增結束後，分別加入2ul 6×buffer，混勻後各取8-10 ul擴增產物進行凝膠電泳，觀察有無相應的基因條帶。
三、分離菌株保存
1、陽性樣品的增殖
將鑑定為陽性的菌液繼續3區劃線接種TSA 培養基（8%雞血清+0.01%NAD+）37℃ CO2 培養箱或厭氧罐中培養12-16h。接種普通營養瓊脂進行無菌檢驗，確定為無菌後，保存備用。
2、分離株的凍存
取單菌落接種2mlTSB培養基（含8%雞血清+0.01%NAD+),37℃160rpm 震搖8-10小時，然後取0.7ml 菌液與 0.3ml 甘油混合，加入 1.5ml 細菌凍存管中，-80℃冰箱保存，不超過3個月。
或者取菌液0.1ml接種5-7日齡雞胚卵黃囊，24h內，收集雞胚卵黃液，加入凍存管中，-80℃可保存1年以上。長期保存可將卵黃液凍幹，-80℃保存。
四、注意事項
病料不管在4℃保存還是-20℃以下凍存都會影響其檢出率，反覆凍融會明顯降低病料裡的細菌載量。
1、一般建議在用藥前採集樣品，便於檢出，如果採集樣品已經用藥，建議延長培養時間。
2、在診斷時應儘可能採取3-5樣品，分別接種、檢測。
3、分離鑑定樣品不宜存放時間過長，4℃不超過3天，-20℃不超過30天，不能反覆凍融。
副雞禽桿菌的菌液在-80℃保存期基本持續在半年左右，長期保存會使其失活。如果
保存副雞禽桿菌的菌種，建議凍幹保存。閱讀更多 養殖寶 的文章
