來源：檢驗醫學
國家衛健委近日發佈體液檢驗最新行業標準，WS/T 662—2020 《臨床體液檢驗技術要求》。該標準自2020年10月1日起執行。檢驗君將該標準中檢驗人較為關注的一些重點提煉在下方供大家參考。文末有完整行業標準下載方法"
腦脊液檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1. 腦脊液標本採集宜使用無菌試管（用於細胞學檢查的標本不宜使用玻璃材質的容器），若能採集足量標本，應將其分裝至3～4 支試管，每管宜取3 mL～5 mL，一般無需使用抗凝劑。
2. 第1 管用於化學和免疫學檢查（如蛋白質、葡萄糖等），第2 管用於微生物學檢查，第3 管用於細胞計數和分類計數。如需要做其它檢查（細胞病理學檢查等），宜採集第4 管標本。若第1 管混有穿刺出血，不可用於以蛋白質檢查作為主要依據的疾病診斷（如多發性硬化症）。
3. 腦脊液標本應在室溫條件下儘快運送，細胞計數和分類計數宜在1 h 內完成檢查，以免細胞破損。只有用於蛋白質和核酸分析的標本，可貯存於冷凍條件下（—20 ℃以下）。
4. 腦脊液微生物學檢查標本不可冷藏，在室溫條件下立即送檢或在患者床旁接種。
5. 外觀正常的標本無需稀釋，渾濁和血性標本需進行1:10～1:200 倍稀釋，稀釋倍數甚至更高（需要時）。進行細胞計數時可使用等滲鹽水稀釋標本；進行有核細胞計數時，可使用3%冰醋酸對標本進行處理。
二、手工法細胞計數方法
a) 將標本充分混勻，充液前可用旋轉式攪拌器混勻（時間不能超過2 min～5 min）或手工顛倒混勻10～15 次，避免過度震盪造成細胞破損，也不能產生氣泡。
b) 分別吸取少量充分混勻的標本，充入計數板兩側的計數池（應確保計數板潔淨），靜置5 min～10 min（時間長短取決於細胞沉澱的效果）。
c) 使用低倍鏡（10×）瀏覽細胞分佈情況，細胞分佈應均勻（每個大方格內細胞數量相差宜不超過10 個），細胞應無重疊，否則宜重新充液。
d) 在高倍鏡（40×）下選擇合適的區域儘快進行細胞計數。每個計數池細胞計數區域的確定原則是：若初步估計9 個大方格中細胞數少於200 個，則計數9 個大方格（計數區域相當於9mm2）；若估計9 個大方格中細胞數大於200 個，則計數4 個角的大方格（計數區域相當於4mm2）；若估計1 個大方格中細胞數大於200 個，則計數中央大方格內4 個角和中央1 箇中方格（計數區域相當於0.2mm2）。計數壓線細胞時，應遵循“數上不數下，數左不數右”的原則。
2.4.1.4 紅細胞計數和有核細胞計數宜在同一計數池中完成，取兩個計數池計數結果的均值進行報告。
三、細胞形態學檢查
1. 應在標本採集後4 h 內完成細胞塗片，若超過4 h，結果報告時宜標註“細胞分類計數結果可能不可靠”。
2. 宜使用細胞離心塗片機（細胞甩片機）製備塗片進行細胞形態學檢查，滴加標本前先向甩片機的標本室中加入1 滴22%白蛋白溶液（無菌），可增強細胞對載玻片的粘附性。
3. 塗片製備後應置於室溫條件自然晾乾，宜進行改良瑞氏染色。
4. 進行細胞形態檢查時，應能正確識別：成熟紅細胞、有核紅細胞；中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、肥大細胞；淋巴細胞、反應性淋巴細胞、漿細胞；單核細胞、巨噬細胞；腦室內襯細胞、柔腦膜細胞；惡性腫瘤細胞（原始細胞、淋巴瘤細胞、非造血系統腫瘤細胞等）；細菌、真菌和寄生蟲等。
5. 應對有核細胞（包括各類造血細胞、內襯細胞、腫瘤細胞和非典型細胞）進行分類計數，計數結果以百分比報告。細胞類型無法確定時，可將其歸入“非典型細胞”，並在報告中加以描述。
6. 懷疑惡性腫瘤時，應全片查找腫瘤細胞，發現疑似腫瘤細胞時應及時通知臨床進一步做細胞病理學檢查。
四、病原學檢查
1. 塗片檢查
對混濁或膿性腦脊液可直接塗片，染色鏡檢。對無色透明或無明顯混濁的腦脊液，應使用細胞離心塗片機（細胞甩片機）離心。將腦脊液標本離心取沉澱物進行塗片，經革蘭染色查找肺炎鏈球菌、葡萄球菌和鏈球菌等，亞甲藍染色查找腦膜炎奈瑟菌，抗酸染色查找結核分枝桿菌，墨汁染色查找隱球菌。對於疑似寄生蟲感染的患者，應注意查找吸蟲卵、阿米巴滋養體和絛蟲囊尾蚴等。
2. 病原體培養
選擇合適的培養基、培養條件進行普通細菌、苛養菌、結核分枝桿菌或真菌培養，臨床懷疑腦膿腫時宜進行厭氧菌培養。所有進行培養的腦脊液宜同時進行病原菌的塗片檢查。
3. 抗原檢測
可檢測腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、隱球菌等病原菌抗原，檢測結果宜與塗片檢查和病原培養結果一起解釋，腦脊液隱球菌抗原陽性有確診意義；其他抗原陽性是重要診斷提示，宜結合病史、臨床表現、腦脊液其他檢查（細胞學、塗片和培養、化學等）綜合判斷。
4. 核酸檢測
必要時，實驗室可採用PCR等分子生物學方法檢測結核分枝桿菌、腦膜炎奈瑟菌等病原菌核酸。
漿膜腔積液檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1.漿膜腔積液包括胸水、腹水、心包腔積液等，不同檢查項目的標本採集要求下表。
表1 漿膜腔積液標本採集要求
檢查項目抗凝劑的選用推薦採集標本量（mL）細胞計數和分類計數乙二胺四乙酸（EDTA）5～8總蛋白、乳酸脫氫酶、葡萄糖、澱
粉酶肝素或不使用抗凝劑8～10革蘭染色塗片檢查、細菌培養多聚茴香腦磺酸鈉（SPS）、不使用抗凝劑、
無滅菌或抑菌作用的抗凝劑8～10抗酸桿菌培養多聚茴香腦磺酸鈉（SPS）、不使用抗凝劑、
無滅菌或抑菌作用的抗凝劑15～50細胞病理學檢查不使用抗凝劑、肝素、乙二胺四乙酸（EDTA）5～50
2. 標本應在室溫條件下儘快送檢；細胞計數和分類計數的標本應儘快檢測，若無法及時檢測，染色後的標本置於2 ℃～8 ℃條件下保存，宜 48 h 內完成檢測。
二、化學和免疫學檢查
1.漿膜腔積液化學檢查主要包括蛋白質、乳酸、葡萄糖和酶學測定等；免疫學檢查主要包括腫瘤標誌物、免疫球蛋白測定等。
2.葡萄糖測定應在標本採集後1 h 內完成，無法及時檢測的標本應用氟化鈉抗凝管採集；其他化學檢查宜在2 h 內完成；宜同時檢測血清標本中的相應物質並進行比較。
3.嚴重化膿標本不宜進行pH 檢測。
三、細胞學檢查
1.細胞數量過多、渾濁或血性標本宜用等滲鹽水進行稀釋；有凝塊的標本不能用於細胞計數和分類計數，但可用於細胞病理學檢查，需先輕輕攪動凝塊釋出細胞並進行洗滌處理。
2.細胞計數方法可參見腦脊液手工法細胞計數方法。
3.細胞分類計數宜採用細胞離心法制備塗片，應先洗滌細胞，以提高塗片中的細胞數量並保持細胞形態。塗片自然乾燥，宜使用改良瑞氏染色方法染色後進行細胞分類計數，發現可疑惡性細胞時，應及時通知臨床送細胞病理學檢查；發現結晶時，應在報告中註明。
四、病原學檢查
懷疑感染時，所有標本應進行革蘭染色塗片和培養。懷疑厭氧菌感染，則加做厭氧菌培養；腹水、肝膿腫穿刺液宜常規進行厭氧菌培養。懷疑寄生蟲感染時，應將標本離心後取沉渣進行塗片，宜使用改良瑞氏染色方法進行檢查，查找有無微絲蚴、包蟲棘球蚴頭節和小鉤、阿米巴滋養體等。
關節腔積液檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1.採集多管標本時，第1 管應使用無抗凝劑試管，宜採集4 mL～5 mL，並觀察是否凝固，離心取上清液做化學和免疫學檢查（如葡萄糖、白蛋白和脂類，類風溼因子和補體測定等）；第2 管應使用肝素鈉（25 U/mL）或EDTA 溶液抗凝，用於細胞計數、分類計數和結晶鑑定時宜採集1 mL～3 mL，如同時做細胞病理學檢查時宜採集4 mL～5 mL，使用肝素鋰、草酸鹽或EDTA 粉末抗凝，可能影響結晶檢查結果；第3 管應使用肝素（25 U/mL）抗凝、也可以採用多聚茴香腦磺酸鈉（SPS）抗凝劑或無抗凝劑試管，宜採集4 mL～5 mL，用於微生物學檢查。
2.當標本量較少難以完成所有檢查時，應及時與臨床進行溝通，不宜拒收標本。
3.標本應在室溫條件下儘快送檢並完成檢查。
二、化學和免疫學檢查
葡萄糖測定應在1 h 內完成，無法及時檢測的標本應使用氟化鈉抗凝管採集。
三、細胞學和結晶檢查
1.標本處理
關節腔積液較為粘稠，宜使用等滲鹽水或透明質酸酶緩衝液對標本進行處理，如每毫升關節腔積液加透明質酸酶400單位，置於37 ℃孵育10 min。
細胞數量過多、渾濁或血性標本宜用等滲鹽水進行稀釋；進行有核細胞計數時，可使用低滲性鹽水（0.3%）破壞紅細胞，但不可使用乙酸，以免形成黏蛋白凝塊影響鏡檢。
2.塗片檢查
宜使用細胞離心法制備溼片和染色塗片（塗片自然晾乾後用甲醇固定至少5 min，宜使用改良瑞氏染色方法，進行細胞學和結晶檢查。宜使用光學顯微鏡的暗視野或偏振光顯微鏡進行結晶檢查（如尿酸鹽結晶、焦磷酸鈣結晶），應注意區分塵粒、劃痕、碎片與病理性結晶。
3.細胞計數
細胞計數方法同腦脊液細胞計數，宜在標本採集後1 h內完成檢測。關節腔積液標本較難混勻，可用旋轉式攪拌器混勻5 min～10 min，避免過度震盪造成細胞破損。
4.病原學檢查
應作為關節腔積液常規檢查項目，將標本離心後取沉澱進行革蘭染色塗片檢查，查找有無致病菌。必要時，根據臨床表現選擇合適的培養基進行細菌或真菌培養。
糞便檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1.應儘可能選取附著黏液、膿液、血液的新鮮異常糞便（宜多個部位留取，蠶豆大小），並避免尿液和異物（如衛生紙、花露水、強力清潔劑、除臭劑等）汙染。採集後的標本宜在1 h內（夏季）或2 h內（冬季）送檢。
2.糞便隱血試驗宜連續3天每天送檢標本（適用時），每次採集糞便2個部位的標本送檢（置於同一標本容器中）。不可使用直腸指檢標本。
3.進行細菌檢查的標本應在發病初期和使用抗生素前採集，腹瀉患者標本應在急性期（3天內） 採集。進行厭氧菌培養的標本應儘快送檢，必要時在床旁接種。
4.查原蟲滋養體的標本應留取含膿血的稀軟糞便，排便後立即檢查，冬季需要採取保溫措施送檢；查蟯蟲卵時，在子夜或早晨排便前用肛拭子在肛周皺襞處採集標本；查血吸蟲毛蚴時，應至少採集30 g 新鮮糞便；查寄生蟲蟲體及蟲卵計數時，應收集24 h糞便。
二、糞便隱血試驗
1.糞便隱血試驗檢測方法有化學法和免疫法，不同方法的靈敏度和特異性存在差異，實驗室在選用新方法前應明確其分析性能。當一種方法的檢測結果與臨床不符時，宜採用另一種方法進行驗證。
2.應按試劑說明書要求的比例使用稀釋液或等滲鹽水對標本進行稀釋。當明顯柏油樣標本的檢測結果呈陰性時，應調整稀釋倍數後再次進行檢測。
3.檢測臨床標本前應至少進行陰性和弱陽性水平的室內質控並保證結果在控。應按說明書規定的時間和標準進行結果判斷。
三、塗片檢查
1.應使用潔淨的載玻片和新鮮等滲鹽水製備標本塗片，塗片應厚薄適宜，以能透視紙上字跡為宜，加蓋玻片。必要時進行染色（如白細胞檢查時宜使用亞甲藍染色）。
2.應按“城垛”式順序，先用低倍鏡觀察全片，再用高倍鏡觀察10個以上視野，查找各種細胞、寄生蟲卵、真菌、細菌和原蟲等病理成分。
3.查見寄生蟲卵時，應描述蟲卵的形態特徵。遇到可疑蟲卵或罕見蟲卵時應請上級檢驗人員複核，或送至技術水平更高的實驗室進行確認。使用集卵法（適用於各種蟲卵）、飽和鹽水漂浮法（適用於檢出鉤蟲卵）、離心沉澱法或自然沉澱法處理標本可提高寄生蟲卵的檢出率。
4.結果報告應報告有無病理成分，如各種細胞、寄生蟲及蟲卵、真菌和原蟲等，細胞以“最低數～最高數/HP”進行報告。
精液檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1.實驗室應向患者提供精液標本採集說明和符合要求的標本採集容器。標本採集應使用清潔乾燥、對精子無毒性、廣口的玻璃或塑料容器，進行微生物培養的標本應保持無菌。
2.標本採集後應記錄採集方法、採集時間、標本完整性及禁慾時間等信息。
3.標本採集後1 h內，評估精液液化狀況和外觀、測量精液體積，製備溼片並進行精子活力和精子存活率檢查，製備精液塗片（用於評估精子形態），稀釋精液並進行精子計數，進行混合抗球蛋白反應試驗等檢查（需要時），離心處理精液（用於化學檢查）；採集後3 h內，進行微生物學檢查；採集後4 h內，完成精液塗片固定、染色和精子形態檢查，進行精液化學檢查。
4.對於無法液化的精液標本，可採用機械混勻（如加入適量磷酸鹽緩衝液，使用移液器輕輕反覆吹打）或酶消化（如澱粉酶、菠蘿蛋白酶）的方法進行處理。
二、顯微鏡檢查
1.精液顯微鏡檢查宜包括精子活力、精子存活率、精子計數、精子形態、生精細胞及其他細胞檢查等。
2.精子活力檢查可使用普通光學顯微鏡觀察染色或未染色的精液標本，宜使用相差顯微鏡檢查新鮮、未染色的標本。先在低倍鏡下觀察黏液絲、精子凝集、非精子細胞（如上皮細胞、白細胞、未成熟精子細胞、斷裂精子頭部或尾部）等成分，在高倍鏡下進行精子活力評估（至少計數200個精子，分別計算前向運動、非前向運動和不活動精子的百分比）。
3.精子存活率檢查可採用伊紅染色、伊紅-苯胺黑染色法或低滲膨脹試驗進行，應在精液標本收到後立即檢查，宜在30 min內完成，勿超過1h。
4.進行精子計數時，應對標本進行稀釋（可採用1:20、1:5或1:2的稀釋倍數），將標本稀釋兩份，分別充液至計數池，根據精子數量選擇合適的計數區域，每份稀釋標本各至少計數200個精子，用兩份稀釋標本計數結果的均值計算每毫升精液中精子數量（精子濃度）和精子總數（精子濃度×精液量）。
5.進行精子形態檢查時，取1滴液化且混勻的精液製備塗片，塗片自然晾乾、將塗片浸入95%的乙醇中至少15 min進行固定後做巴氏染色；或用75%乙醇固定 60min後做Shorr染色；或用95%甲醇固定60min做Diff-Quik染色。在低倍鏡下觀察塗片，在油鏡下計數至少200個精子，計算正常和異常形態精子百分比。
6.特殊需要時，將標本染色後在油鏡下觀察精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞及精子的比例，有助於評估生精功能是否存在異常。
三、計算機輔助精液分析（CASA）
CASA系統對檢測精子濃度有一定侷限性，在（20～50）×109/L的範圍內檢測結果較為可靠。精子濃度過高時，應將標本進行適當稀釋。
四、精液檢查參考區間
實驗室宜在驗證的基礎上採用世界衛生組織最新版關於“人類精液檢查與處理實驗室手冊”提供的精液檢查主要參數（精液體積、精子存活率、精子總數、精子濃度、精子活力、精子前向運動、精子形態）的參考區間下限（第5百分位數及其95% 可信區間）。
陰道分泌物檢驗
一、標本採集、轉運和貯存
1.標本採集宜使用1個或多個滅菌拭子（頭部包有聚酯棉球）或滅菌圈（棉球對淋病奈瑟菌有影響，木質器材對沙眼衣原體有影響）。應根據檢查目的採集不同部位的標本，如細菌性陰道炎檢查時應採集陰道側壁分泌物，滴蟲性陰道炎檢查時應採集後穹隆分泌物。
2.標本應在室溫條件下儘快送檢，檢查滴蟲時，標本宜保溫送檢。
3.冷藏標本不利於淋病奈瑟菌復甦和影響陰道毛滴蟲滋養體動力識別，但可用於沙眼衣原體或病毒（如單純皰疹病毒）檢查。
二、細胞學和病原學檢查
1.應在顯微鏡下對陰道分泌物塗片中的細胞、細菌、真菌和寄生蟲等有形成分進行檢查，可採用等滲鹽水直接塗片法，使用塗片染色法（瑞氏染色或革蘭染色）可提高檢出率。
2.宜根據白細胞、上皮細胞、乳酸桿菌和雜菌數量多少進行陰道分泌物塗片清潔度判斷並報告，判斷標準見下表。亦可對菌群密集度、菌群多樣性和優勢菌群（正常情況下應為革蘭陽性大桿菌，即乳酸桿菌）進行評估和報告。
表2 陰道分泌物塗片清潔度判斷標準
清潔度白細胞或膿細胞（個/HP）上皮細胞桿菌球菌I 度0～5滿視野多無II 度5～151/2 視野中少III 度15～30少量少多IV 度＞30無無大量
3.應注意查找有無陰道毛滴蟲、致病性細菌（如陰道加德納菌、彎曲弧菌、淋病奈瑟菌）和真菌（菌絲、孢子和芽生孢子）等。查見線索細胞是診斷細菌性陰道病的重要指標，當同時查見菌絲、孢子和芽生孢子時，應考慮真菌性陰道炎；僅孢子陽性時，應結合乙酰氨基糖苷酶試驗和臨床做出診斷。必要時，實驗室宜根據乳酸桿菌、加德納菌/普雷沃菌和動彎桿菌的數量進行Nugent評分並報告。
使用血液分析儀的體液細胞分析功能進行體液細胞自動化檢驗的要求
A.1 儀器的選擇
實驗室應選擇具有體液細胞分析功能的儀器進行體液標本的檢測，並確認儀器已獲監管機構批准的檢測標本類型、可進行計數的細胞類型以及報告參數能夠滿足實驗室的需求。
A.2 檢測系統的性能驗證
在檢測患者標本前，應對檢測系統的性能進行驗證，至少包括本底計數、精密度、分析靈敏度和分析特異性、正確度和結果可報告範圍等。性能驗證的方法和要求可參考ICSH指南和儀器製造商的說明書。
每個實驗室都應建立所用檢測系統有核細胞計數和紅細胞計數的檢測下限，實驗室規定的檢測下限不能低於儀器的最低檢出限。
A.3 檢測過程
儀器的使用應遵循製造商的建議。在檢測標本（尤其是CSF標本）前，應首先進行本底計數，且保證計數結果符合要求，若重複2次本底計數結果仍不符合要求，應對儀器應進行清洗或日常維護。
實驗室應有檢測結果超出可報告範圍時的處理程序，如對標本進行稀釋（或調整稀釋比例）、採用手工法進行檢測等。
A.4 複檢規則的建立與驗證
實驗室應制訂儀器法體液細胞計數的複檢規則並進行驗證。建立複檢規則前，必須首先熟悉儀器的檢測性能，如檢測下限、報警提示、測定圖形、特殊參數等。出現以下情況時，必須進行復檢：
1) 儀器細胞分類結果異常，提示異常細胞存在的可能。
2) 細胞分類散點圖異常，需要確認是否有非細胞性微粒物質及細菌干擾等。
3) 儀器細胞計數結果低於檢測下限。
4) 與大細胞相關的參數升高，不能排除腫瘤細胞的存在。宜採用直接鏡檢法計數和塗片染色形態學檢查兩種方法進行復檢。
A.5 室內質控
實驗室應使用至少2個濃度水平（包括正常和異常）專用的質控品開展室內質控。質控品檢測應採用與臨床體液標本檢測相同的方式（同一體液檢測通道）進行處理和分析。
A.6 結果可比性
實驗室內部有多個檢測系統時，應通過定期進行檢測系統間的結果比對保證實驗室內部檢測結果的可比性；實驗室應通過參加室間質評或與其他實驗室進行結果比對的方式保證實驗室間檢測結果的可比性。用於結果比對的標本濃度應覆蓋檢測系統的可報告範圍。
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