3月27日雅培（Abbott）研发的ID NOW COVID-19 test获得了美国FDA的紧急使用授权（emergency use authorization，EUA），这是目前最快速的COVID-19核酸检测试剂，阳性结果最快可在5分钟内获得，阴性结果可在13分钟内确认。
在美国总统川普的强势安利下，这款神器瞬间刷屏，有人认为这是美国高科技的象征；有人认为其灵敏度不如国产试剂盒，远称不上神器二字；有人认为它没有很好的control所以假阴性比例高；有人认为利用这款仪器月测500万是吹牛；有人分不清核酸检测和抗体检测，认为我国二月份就有5分钟检测试剂了。那么ID NOW到底怎么样？时隔两周关于它的介绍还是寥寥无几。本文将从ID NOW的历史、设备、试剂组成、操作流程、性能原理方面进行全面介绍。
ID NOW的前世今生
2000年Ionian公司成立，3年后该团队在PNAS发表了名为"Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides."的文章，首次介绍了缺口内切酶扩增技术。随后该技术被应用于甲型乙型流感（Influenza A&B），A族链球菌（Strep A），呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus）的检测上。
2010年Alere收购Ionian公司，并于2014年在欧洲推出了Influenza A&B的商品化检测试剂。
2017年雅培收购Alere，并将该检测正式更名为ID NOW，作为雅培诊断部门快速诊断业务的一部分。
一切的起源，2003年PNAS
ID NOW COVID-19的基本介绍：
检测样本：鼻拭子（Nasal Swab）、咽拭子（Throat Swab）和鼻咽拭子（Nasopharyngeal Swab）划重点！不是血！是测病毒RNA，不是测抗体！
检测平台：ID NOW平台，这个仪器只有一台烤面包机大小，重约3公斤，适用于进行POCT（Point-of-Care Testing，床旁检测或即时检测）。
ID NOW检测平台
试剂盒内容：
扩增室：橙色部件，包含两个装有冻干试剂的密封反应管，用于靶向扩增SARS-CoV-2核酸和一个内参对照（internal control）。是设有内参对照的，但是具体怎样质控缺少细节
样品容器：蓝色部件，含2.5 mL洗脱/裂解缓冲液。ID NOW不需要专门的核酸提取步骤
转运装置：白色部件，用来从样品容器转移2 x 100μL样本到扩增室。
无菌拭子、阳性对照拭子、阴性对照拭子
ID NOW 试剂盒成分
具体流程：
简单说就是将拭子在样品容器中（含有2.5 mL洗脱/裂解缓冲液）涮一涮，之后用转运装置吸取2 x 100μL加入到扩增室的PCR管中（仅含有冻干的试剂）进行扩增反应。整个过程不需要用到试管架和移液枪、且不需要专门的核酸提取步骤，这与real-time PCR是不同的（后续LOD的理解涉及这部分内容）。
ID NOW 操作流程
检测原理：
设计引物利用缺口内切酶扩增技术（nicking endonuclease amplification reaction ，NEAR)技术特异性扩增RdRp片段的一部分（具体是哪段缺乏细节），扩增倍数可达108-1010，利用荧光标记的分子信标特异性地识别每个扩增的RNA靶标，ID NOW平台监测荧光信号的积聚，达到阈值即显示为阳性，未达到则为阴性。
扩增子靶点在新冠状病毒基因组上的相对位置，GenBank NC_004718
NEAR的原理
由于COVID-19技术原理的细节还没有披露，这里以同样为RNA病毒的流感病毒检测为例：
NEAR反应体系包括：2个引物、3个酶（逆转录酶、DNA聚合酶以及nicking核酸内切酶）、荧光标记分子信标。
具体是哪种酶呢？2009年的US2009/0017453A1专利中是这样描述的，聚合酶从以下聚合酶中挑选一种或几种：Bst（大片段）、9oN、VentR（exo-）DNA聚合酶、Therminator和TherminatorⅡ。nicking核酸内切酶从以下挑选一种或几种：Nt.BspQⅠ、Nb.BbvCi、Nb.BbsmⅠ、Nb.BbsrDⅠ、Nb.BtsⅠ、Nt.AlwⅠ、Nt.BbvCⅠ、Nt.BstNBⅠ、Nt.CvipⅡ、Nb.Bpu10Ⅰ和Nt.Bpu10Ⅰ。
具体到流感病毒的检测，没有细节详细说是哪种，但是根据酶切位点在NNNN之后，推测是Nt.BstNBⅠ，因为它的酶切位点也是4个N之后。
NEAR的原理简单概括就是
首先利用逆转录酶以RNA单链为模板合成DNA单链，正向引物和反向引物分别与模板结合延伸并在nicking内切酶的作用下形成正向引物和反向引物框定的正向引物+X+Y+反向引物的NEAR扩增二聚体。之后以此为模板，每轮由nicking内切酶在单链上切开缺口，DNA聚合酶侵入延伸形成新的双链，如此往复（B3a）。而切下的单链XY或X'Y'模板也可以与新的引物结合在DNA聚合酶作用下延伸，进入切口延伸的循环（B4a）。在不断的延伸、切除、延伸循环中实现XY和X'Y'模板的指数级扩增。1、NEAR扩增二聚体的形成
NEAR扩增二聚体的形成
2、产物指数扩增：
在延伸、切除、延伸循环中，产物指数扩增
以上就是有关ID NOW COVID-19 test的介绍。第二部分将就围绕ID NOW的一些争议进行讨论。
参考文献：
1. Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides. PNAS, 2003
2. Evaluation of Alere i Influenza A&B for Rapid Detection of Influenza Viruses A and B. JCM，2014
3. Amplification litigation. Clinical Omics，2019
4. Nicking and extension amplification reaction for the exponential amplification of nucleic acids. US20090017453A1, 2009
5. www.abbott.com
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