DNA即时保存试剂盒
品牌：HiMedia
货号：MBT109
规格：100NO/盒
用途：【DNA】存档和快速提取
描述
InstaDNA Kit中提供的Hi705卡设计用于室温收集、装运、归档各种生物样品中的核酸，以进行PCR分析。这些样品包括（但不限于）血液、口颊细胞、组织、培养的细胞，微生物和植物组织。
背景
HiMedia的InstaDNA™试剂盒为DNA提取提供了一种快速经济高效的解决方案，适合分子生物学、研究、临床、刑事和法医学应用。
组件包括Hi705™DNA存储卡和即时DNA提取所需的卡洗脱缓冲液（ID溶液）。
它允许从卡片中即时提取超纯级DNA，并用于各种下游的应用如PCR等。
应用
•法医
•转基因鉴定
•输血医学
•质粒筛选
•食品和农业检验
•药物发现
•基因组学
•STR分析
•动物识别
•全基因组扩增
•分子生物学
Hi705™DNA存储卡（MBT093）
特征
•标本基质未经处理，无添加化学物质
•标本干燥后细胞裂解。当细胞裂解时，DNA被释放并打开到基质上。
•长期室温环境存储DNA，长达21年
•蛋白质在短期应用中是稳定的
优势
•室温储存21年以上，适合各种核酸应用
•可用于样品自动化操作系统
•过程中无化学物质干扰
•与处理/包被过的卡片相比，成本低
•定量
•蛋白质在短期应用中是稳定的
•血液长期储存非常棒
•适合非化学处理的卡应用的场合：例如短期的口腔拭子应用
弱点
•不灭活或杀死病原体
•蛋白质只能在短时间内有活性
使用
要使用Hi705卡，只需简单加样（液体或挤压的组织），室温风干，然后打孔（其大小取决于实验应用），取下所打卡纸。卡纸可以不用洗脱，直接扩增。Hi705卡也可以用传统的样品制备方法制备（见下文）。
注意：样品用过后，将Hi705卡存储在两个硅胶包的无菌密封袋中。
所需的未提供的材料
•泡沫签（产品编号：PW1174）（用于口腔样本）
•封口膜（产品编号：LA018）（用于植物样本）
•台式微量离心机（配有适合2.0毫升管的转子）
•乙醇（96-100％）
•分子生物学级的水（商品编号：ML024）
•加热装置
•无菌镊子
•无菌EP管
•微量移液器和吸头
步骤
血液样本的应用（新鲜的全血或或加有某些抗凝剂）：
1. 对Hi705卡进行样品信息和标识标记。
2. 在卡上的圆形区域内以圆周运动将血液滴到卡上。避免反复将血液滴在相同位置，使卡上的化学物质过载。此外，不要擦拭或涂抹卡上的血液。
3. 干血点比新鲜血点显得更暗。在样品打孔孔或处理之前，让卡片彻底的风干。
4. 完全风干后， Hi705卡的样品现已准备就绪，可立即进行操作或存档。
5. 干燥所需时间可能因湿度和条件而异。请遵从你的实验室标准操作程序和指南。
6.进行下游DNA分析（下文）。
口颊细胞样品的收集和转移
1. 将Hi705卡放在干净、干燥、平整的表面上。把卡标上适当的样品信息。
2.使用无菌泡沫棉签（产品编号：PW1174）（未提供）。去掉棉签的外包装。
3. 手持棉签的塑料手柄，将棉签头放在嘴里，沿着口颊、牙龈和舌下，从口腔的两侧收集细胞。用棉签头摩擦口内表面15秒。用棉签的另一头在另一侧口颊取样。从嘴中取出棉签。
4. 在卡上的样品区域处按压棉签。保持棉签不动，使卡片侧面转动挤压棉签至少三次，使样品区域充分饱和。转动到棉签的另一面，并在同一个样品区域内重复以上过程。
注意：用圆珠笔或铅笔画出样品的位置区域。如果不止一个区域，则需要换棉签。
5.完全风干后， Hi705卡的样品则准备就绪。
细菌样本（细菌基因组DNA）的应用
1. 样品浓度可能因样品种类而异；请遵守您的实验室标准操作程序和指导原则。
2. 将5-10μl的细菌悬浮液加到Hi705卡上，然后用圆珠笔或铅笔划出该区域。
3. 完全风干后，卡片的样品准备就绪
组织/细胞培养样品的收集
1. 组织和培养细胞以浓度>300细胞/μl加到Hi705卡上，以进行核酸分析。
2. 完全风干后，卡片的样品准备就绪。
收集植物样本
直接叶片挤压
1.将叶片材料直接放在Hi705卡的圆圈上。加上封口膜（产品编号：LA018）（未提供）或类似的塑料膜加上叶子上。
2. 用钝器（如杵或小锤）施加压力和/或敲击叶子。
3. 当提取物透过Hi705卡的背面时，收集过程完成。
4. 完全风干后，卡片的样品准备就绪。
1.将Hi705卡上的样品区域打孔或切下来，放置到容器中。
2.初始洗涤步骤需要在200μl PCR管中加入150μl蒸馏水，每个样品纸在里面室温孵育5分钟。吸出蒸馏水并弃去。
3.将5μl蛋白酶K（20mg / ml）（商品编号DS0013）加入到150μl稀释的洗液中（产品编号：DS0012）。 在65℃下孵育样品30分钟。丢弃洗液。
4.将另外150μl稀释的洗液加入到样品中并室温孵育3分钟。丢弃洗液并再重复洗一次。
5.加入200μl TE缓冲液（产品编号DS0086），室温孵育5分钟。丢弃洗液。
6.将样品在56-65°C干燥或过夜。
7.根据实验室的标准操作进行样品PCR扩增程序。
注意：样品在卡片上制备后，用户可直接进行PCR扩增或可以从卡片中洗脱出DNA（步骤参见下文），然后进行PCR扩增。
DNA从卡片上洗脱（可选项）
洗脱流程I
注意：洗脱的DNA可能不稳定，不能长期保存。使用者可按照洗脱流程II进行。
1. 要从卡上洗脱DNA，可将处理好的卡片放入含有50μl ID溶液的无菌离心管中（未提供）。
2. 将管在加热块上95℃孵育5分钟。
3. 使用无菌镊子，从溶液中取出卡片纸（挤压，以恢复最大体积的洗脱物）。包含有DNA的溶液可以储存 （2-8℃或-20℃）或进行进一步分析（即PCR）。
洗脱流程II
1. 要从卡上洗脱DNA，可将处理好的卡片放入含有140μl ID1溶液的无菌离心管中（未提供）。
2. 在65℃孵育5分钟。
3. 加入260μl ID2溶液，脉冲漩涡5次，彻底混匀。
4. 在室温下孵育样品10分钟。脉冲涡旋10次以混合。
5. 使用无菌镊子，从溶液中取出卡片。含有DNA的溶液可以储存（短期储存在2-8°C或长期储存在-20℃）或直接进一步分析（即PCR）。
DNA扩增方案
1. 样品卡
a. 口颊拭子样品：建议打孔或剪去卡上1mm-3mm的样品区域，用于扩增。将剪下的样本放入PCR预混液里。
b. 血液样品：建议打孔或剪去卡上1mm-3mm的样品区域，用于扩增。将剪下的样本放入PCR预混液里。
注意：如果样品中的DNA浓度较低，则用户可以打孔5mm，用于进行PCR扩增。
2. 保证 PCR的反应体积完整。
3.根据实验室的标准操作流程进行PCR直接扩增
10μl PCR产物上样在1%的琼脂糖凝胶上
泳道1: 100bp DNA ladder
泳道2：阴性对照
泳道3：使用MB545（HiPurA™结核杆菌DNA纯化试剂盒）提取的结核杆菌（H37RV）DNA的PCR数据
泳道4：点样在Hi705™DNA存储卡上的培养的结核杆菌的PCR数据（直接PCR）
泳道5：点样在Hi705™DNA存储卡上的培养的结核杆菌的PCR数据（微卡上的DNA洗脱后）
存储
InstaDNA Kit在环境温度（15-30°C）下稳定2年。Hi705卡可以在各种温度下储存；从环境温度（即15-30℃）一直到-20℃。
样品保护和处理
始终戴手套以避免Hi705卡的污染。处理生物样本时请遵从您的实验室的标准操作规程和注意事项。
閱讀更多 締一0601 的文章
