图像处理:“应当”和“不应当”做的事

图像处理对于以发表图像的形式展示图像数据来说是必要的,但是不恰当的图像处理会导致论文被拒以及对研究可信度的怀疑。即使故意舞弊相对罕见,但是由于无知导致对图像不当处理的情况经常发生。Journal ofCellularBiology(JCB)是首批严格检查图像和筛查图像处理的期刊之一。由JCB的出版商The Rockefeller University Press制定的指南(1)自其发布以来已被广泛使用。其它期刊和组织也发布了它们的指南(2-4)。下面我们总结了图像准备中,允许的和应该避免的要点。

1.亮度和对比度改变。这些变化被认为是线性的(例如,所有像素变亮),将这些改变应用于整个图像时通常是允许的。不要仅改变局部区域使得某些特征变亮或变暗。请记住,即使允许这样的更改,这些更改也应当是适度的,并且不应当导致结果解释的更改。例如,如果过多地提高亮度,可能使太多像素拥有最大亮度,导致这些像素间的细微差别丢失。避免使用图像程序的自动对比度,自动色阶和自动颜色工具,因为它们可能会过度处理图像。调整gamma值被认为是非线性变化,应当避免。当一定要调整gamma值和使用伪着色时,应在论文中披露。要记住的另一点是,如果需要展示一组图像以进行比较(例如,一个对照和几个不同的治疗),所有的图片均应当使用相同的设置拍摄并使用相同的处理方式。没错,这这意味着您应当记录用于拍摄的设置以及图像的处理方式。2.裁切。我们通常不需要相机上得到的那样显示整个图片,所以裁切图片以除去不必要的信息或边缘周围空白的区域是允许的。但是,请不要将图像裁切后将部分拼接在一起,就像它们是一张图片一样。如果必须将某些部分拼接在一起,则应当勾勒出这些部分的边缘以明确地表示它们来自不同的地方。例如,如果你以泳道顺序A,B,C,D的进行westernblot,但为了更好地表达你的研究,你想按照A,D,B,C的顺序展示,你可以将D泳道剪切插入A和B之间。但是你必须在剪切的D周围画线以披露它是被移动过的事实。裁切图像时要记住的几件事:第一,裁切不应引入偏差,例如,显示的区域仍应代表样本。第二,有时留空是必要的。裁切在westernblot中尤为重要,因为其通常只展示目标蛋白带。裁切距离条带太近可能让读者怀疑你试图掩盖附近还有另一个条带的事实。一些期刊要求在图像上显示条带上方和下方的印记区域。第三,要在一起展示进行比较的图像应当裁切为相同的大小。


3.调整尺寸。发表在期刊文章中的图片尺寸几乎永远不会与原始图片相同。尺寸调整是将图片设置为期刊所需大小的必要步骤。通常,缩小图片(例如,减少像素数)是可以接受的。计算机软件可以通过将像素取平均值来将多个像素组合为一个像素,而人眼不会察觉到差异。不要试图增加图像的像素数,因为计算机软件将不得不创建本不存在的额外像素。这会导致您数据的错误解释,也无法使低分辨率的图像看起来更好。在重新调整大小之前,应在图像上添加比例尺,以使最终图形的尺寸比例尺正确。同样,应将用于比较的一组图像放在一起展示,并以相同的方式调整其大小。以上三种类型的更改是最基本的,而且几乎只有这些是允许的让图片看起来更好的几种更改操作。更复杂的操作都需在论文中进行描述。以下要点可以帮助你最大程度地减少对图像的修改操作。1.提前计划。如果您计划好了蛋白质印迹实验,则不太可能需要重新排列图中的泳道。

2. 获取最佳图像。熟悉用于图像采集的仪器和软件,以使所拍摄的图片接近应在论文中显示的方式。以尽可能高的分辨率拍摄照片并保存为正确的格式(TIFF,而不是JPEG)。您还应该以图像采集软件的源文件格式保存文件,因为此类文件可能包含仪器设置的元数据,例如放大率信息。

3.始终保存原始图像文件。当您开始处理图像时,请保存另一个副本,以便始终留有原始文件。这样做有几点好处,第一,如果您处理过度或犯其他错误,则始终可以重新开始。第二,期刊编辑可能会要求查看您的原始图像,以确保正确处理了图像。第三,数字图像包含的信息超出了我们肉眼所能看到的范围。一个8位的灰度图像可以具有256个灰度,而人类只能区分大约30个灰度。上述处理旨在使读者获得最佳视觉效果,因此在处理后的图像中,由于图像数据已被改变,某些信息可能已丢失。如果需要进行定量测量,则应使用原始图像,而不是经过处理的图像。


分享到:


相關文章: