王祖藍小學時就讀馬鞍山信義學校與容祖兒是同班同學，中學就讀聖公會曾肇添中學，中學時開始跟隨配音師傅盧雄為電影、廣告配音。後升讀香港演藝學院。
2003年以一級榮譽藝術學士畢業於香港演藝學院戲劇學院，獲優秀學生獎，傑出演員獎多項獎學金。
2005年，在《有招出招》中表演口技，模仿二胡、青蛙、吸塵機、蕭亮、鍾景輝等十多種聲而獲導演葉念琛邀請演出電影《獨家試愛》。
2006年，被調到戲劇組，為郭晉安於劇集《東方之珠》凌風一角作幕後代唱。
2007年，在時裝處境劇《同事三分親》中飾樓華揚名。
2008年TVB臺慶晚會中，與阮兆祥、李思捷組成“扮演天王福祿壽”。在電影《保持通話》中扮演手機售貨員。同年，經無線傾洽加盟英皇娛樂Music Plus為旗下合約歌手，併成為香港小姐競選的司儀。同年，在時裝處境劇《畢打自己人》中飾鄧勵軍，並獲得飛躍進步男藝員獎項。
2009年，成為第28屆香港電影金像獎的司儀之一，並擔任林峰紅館演唱會的嘉賓。同年，為王祖藍度身打造的喜劇電影《矮仔多情》，成為他第一部作為男一號出演的電影。
2010年，王祖藍主演了電影《72家租客》和電視劇《情人眼裡高一D》。3月27日開始，擔任香港TVB扮演綜藝《荃加福祿壽》其中一位主持“祿”。而其塑造的角色handelababy在節目中的臺詞“我接受唔到咯”成為香港和大陸年輕人的口頭禪。7月30日至31日在香港伊麗莎伯體育館舉行一連三場《咪咁扮嘢》王祖藍演唱會。同年暑期，王祖藍參與主演的《人間喜劇》和《翡翠明珠》先後在香港和大陸上映。11月10日，在新浪微博宣佈公開與李亞男的戀情，得到了演藝圈友人和廣大fans的祝福。
2012年8月開機的《葉問終極一戰》中飾演盲公陳。11月29日，在《百變大咖秀》扮演葫蘆娃。12月7日上映的《我的老公不靠譜》飾演李先生，即是毒舌藍。12月27日，在《百變大咖秀》扮演哥哥張國榮。
2013年1月17日，在《百變大咖秀》中模仿吉祥三寶，演繹《吉祥三寶》。1月31日，在《百變大咖秀》中模仿龔麗娜的《法海不懂愛》。2月14日，在《百變大咖秀》與女友一起上臺演繹，互相表白。[8]2月在《食為奴》飾演高天寶，透過飲食幫助雍正成就大業，與雍正有兄弟之誼。鍾情年若碧，後與紀慕雪成親。
2014年，王祖藍加盟綜藝節目《奔跑吧兄弟》並主演了電影版。
2015年，參加綜藝節目《奔跑吧兄弟》第二季。
2016年1月，參加東方衛視社交服務爆笑減壓節目《四大名助》 。在邵氏旗下成立工作室，已在北京成立工作室，已簽下妻子李亞男。2月，由李靜主持的《靜間隔》，請來了王祖藍李亞男佳偶做客新年開播第一期。這是伉儷倆人的首次會見，現場出格親吻秀恩愛，並稱當時他們時常在高速公路上約會，更欺壓在墳場約會 ；同年，參加北京衛視明星真人秀《跨界歌王》的比賽，獲得總決賽亞軍；10月1日，主演的喜劇動作電影《王牌逗王牌》上映； 10月17日，參演電視劇《歡喜密探》上線播出。
2017年4月8日，王祖藍全國巡迴演唱會在北京工人體育館開場。
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