豬藍耳病又名豬繁殖與呼吸障礙綜合徵，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合徵病毒引起的一種高度接觸性傳染病，臨床上以母豬繁殖障礙及各年齡段豬呼吸困難為主要特徵。藍耳病傳播性極強，目前已是危害養豬業最嚴重的疫病之一。豬傳染性胸膜肺炎是由豬胸膜肺炎放線桿菌（APP）引起的一種高度傳染性呼吸道疾病。感染此病的豬常出現呼吸困難、咳嗽、高燒等臨床症狀。該病於1957年次被發現，我國於1987年發現 ，此後逐漸流行傳播開來，對養豬業的危害也逐漸加重，成為豬主要呼吸道細菌性疾病之一。藍耳病病毒基因極易發生變異，不斷有強毒株出現，雖然人們已經加強了豬場的各項防疫措施，但該病在我國還是經常出現。由藍耳病引起的混合感染和繼發感染是被感染豬群死亡率升高的主要原因。現將一例由豬藍耳病繼發感染傳染性胸膜肺炎病例的診斷情況報道如下。
1 發病情況
2016年11月份，廣西橫縣某豬場育肥豬發生疫情，患豬主要症狀為發熱、精神沉鬱、厭食，嚴重的呼吸困難、腹式呼吸、咳嗽。發病的第２日清晨，飼養員發現其中的２頭育肥豬突然死亡，其中１頭豬鼻腔和口腔出現血色泡沫。於是立即解剖病死豬，並將其肺臟、脾臟、淋巴結、關節液等送廣西大學動物傳染病與分子免疫實驗室進行檢測。隔日該豬場送來３４份血清樣品進行藍耳病病毒抗體檢測，血清樣品來自於７～２３周齡的保育、育肥豬。此豬場２８日齡仔豬免疫過一次藍耳病疫苗，之後沒有再免疫。
2 細菌的分離培養
在無菌條件下將病死豬的肺臟、淋巴結、關節液等塗布於胰蛋白腖大豆瓊脂（ＴＳＡ）培養基上，於５％二氧化碳培養箱中３７ ℃培養１６～２４ ｈ 後將疑似菌落劃線接種於血瓊脂培養基上進行純化，選取純化後的菌落塗片，革蘭氏染色後鏡檢，結果在ＴＳＡ 培養基上觀察到表面光滑、半透明、露珠樣、針尖大小的菌落，鏡檢結果為革蘭氏陰性菌。
3 PCR／RT-PCR鑑定
ＡＰＰ 外毒素Ⅳ（Ａｐｘ Ⅳ）存在於該細菌所有血清型中，設計ＡＰＰ Ａｐｘ ⅣＡ 毒素基因特異性引物，Ａｐｘ ⅣＡ 毒素基因ＰＣＲ 擴增後進行凝膠電泳檢測，可見特異性條帶大小為４４２ ｂｐ，與預期目的片段大小相符。將ＰＣＲ 擴增的產物進行回收，並連接到ｐＭＤ－１８Ｔ 載體上，陽性質粒送上海傑李生物公司測序。將測序得到的序列與ＧｅｎＢａｎｋ 中ＡｐｘⅣＡ 毒素基因的序列進行ＢＬＡＳＴ 比對分析，發現同源性高達１００％。
同時進行豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒的PCR檢測，以及豬藍耳病病毒的RT-PCR檢測。結果送檢的兩頭病死豬圓環病毒２型和偽狂犬病毒均為陰性，而藍耳病病毒均為陽性。
4 藥敏試驗
參照美國臨床檢驗標準委員會（ＮＣＣＬＳ）推薦的紙片擴散法（Ｋ－Ｂ 法）進行藥敏試驗。在無菌條件下將分離菌均勻塗布在ＴＳＡ 培養基上，再用無菌鑷子將２０種藥敏紙片分別平鋪於ＴＳＡ培養基表面，培養２４ ｈ後觀察並測量抑菌圈直徑。
根據抑菌圈的直徑大小來判斷細菌對各種藥物的敏感性，結果分離菌對慶大黴素、阿米卡星、諾氟沙星高度敏感，對氧氟沙星、萬古黴素、環丙沙星、卡那黴素、米諾環素、哌拉西林、妥布黴素、多西環素、青黴素中度敏感，對紅黴素、複方新諾明、頭孢唑林、四環素、林可黴素、鏈黴素、頭孢噻肟、氨曲南耐藥。
5 血清抗體的檢測
使用美國ＩＤＥＸＸ藍耳病抗體檢測試劑盒對該豬場送檢的３２份血清進行藍耳病抗體水平檢測。根據試劑盒說明書註明的判定標準，當S/P 值≥0.4時判定為藍耳病抗體陽性，當S/P 值＜0.4時判定為藍耳病抗體陰性。結果在所檢測的３２ 份血清中藍耳病病毒抗體總陽性率為１００％（３２／３２）。
6 診斷結果
根據養殖戶對豬場發病情況、臨床症狀的描述，結合細菌、病毒及抗體檢測結果，最終確診該病例為豬藍耳病繼發感染急性傳染性胸膜肺炎。
7 討論
藍耳病病毒是正鏈ＲＮＡ 病毒，其有一個很大的特點就是容易變異。藍耳病病毒基因容易變異主要體現在疾病臨床症狀的改變和毒力的不同上。該豬場母豬暫時沒有藍耳病典型臨床症狀發生，但是中大豬卻有著嚴重的呼吸道感染症狀，從這個情況便可知此病臨床症狀的改變。病毒感染豬之後，潛伏期一般是４～５ d，主要侵染肺泡巨噬細胞、肺門淋巴細胞、脾臟巨噬細胞及支氣管上皮細胞。其重要的流行病學特徵是持續感染，藍耳病病毒能在豬體內複製幾個月而不表現出臨床症狀。根據該豬場送來的３２份血清樣品抗體檢測結果來看，該豬場大部分保育、育肥豬抗體水平過高。向養殖戶瞭解得知，這批豬在３ 周齡時接種了藍耳病疫苗，大部分豬S/P 值已經超過2.5，甚至個別豬抗體水平達到4.0～4.5，且抗體水平不均勻。說明該豬群正處於藍耳病感染的活躍時期，而且有大量的排毒。藍耳病病毒具有高度的宿主依賴性，只能在豬的肺泡巨噬細胞及其他組織的巨噬細胞中生長，豬一旦感染藍耳病病毒會導致機體免疫力下降，容易繼發其他疾病 。每年的１１月份到次年２月份都是藍耳病的高發期，氣候突變及流感病毒、支原體感染等也可以誘發藍耳病。豬場要做好藍耳病疫苗的免疫工作，但切不可認為接種疫苗後就可以放鬆對藍耳病的警惕性，而應該高度重視生物安全措施，包括隔離、消毒等，在冬季還要做好通風與保暖工作，並適當進行藥物保健，預防流感等疫病。
來 源
《黑龍江畜牧獸醫》2018年第12期第131-133頁《一起豬藍耳病繼發感染傳染性胸膜肺炎的診斷與分析》
作者 | 季程遠 覃一峰 黃培超 方慶勵
劉 芳 陳 櫻 韋祖樟 歐陽康 黃偉堅
廣西大學動物科學技術學院
欽州市動物衛生監督所
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