TJM-F92致弱活疫苗對類NADC30毒株感染可以提供交叉保護
Galliher-Bechley研究發現HP-PRRS減毒活疫苗為免疫豬隻抵抗感染北美藍耳病毒株（NADC毒株）提供很好的保護（Galliher-Beckley et al. 2015）。仔豬試驗研究表明商品化致弱活疫苗TJM-F92和R98對FJ1402攻毒提供部分保護（Zhang et al. 2016）。
本研究結果表明，與高致病性毒株相比，類NADC30毒株（HN201605）的致病力更低；同時我們也發現TJM-F92致弱活疫苗對類NADC30毒株（HN201605）感染可以提供交叉保護；這也說明在中國TJM-F92疫苗是一個安全有效的候選疫苗。
TJM-F92毒株弱毒活疫苗對新出現的類NADC30 PRRSV毒株的交叉保護性研究
1、疫苗免疫與攻毒試驗
根據廠家的推薦，Vac/ChA和Vac/ChB組的豬隻肌肉注射接種1mL TJM（105.0 TCID50/mL）疫苗。疫苗免疫後28天，Vac/ChA和Unvac/ChA組鼻內接種104.5 TCID50/mL PRRSV TJ F3毒株（2mL/頭），而Vac/ChB和Unvac/ChB組通過相同途徑接種相同劑量的類NADC30 HN201605 F3毒株。最後，空白對照組使用相同劑量的PBS處理。攻毒後21天，所有存活豬隻實行人道主義安樂死。
2、豬隻攻毒後臨床表現評估
在TJ毒株攻毒的兩組中，Vac/ChA組的疫苗免疫豬在整個試驗過程中一直都表現正常，如圖所示（圖1、圖2）。
圖1 免疫或未免疫疫苗豬的臨床評分
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
圖2 攻毒後每天監測豬群的直腸溫度
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
然而，Unvac/ChA組所有豬都表現出典型的HP-PRRSV臨床症狀，如嚴重的沉鬱和厭食、跛行和顫抖、呼吸困難、皮膚髮紺和死亡（Li et al. 2016b）。從攻毒後第6天開始，Unvac/ChA組所有豬表現持續高熱（≥41℃），達6天。第2組平均直腸溫度和臨床評分顯著高於Vac/ChA組（P＜0.05）。在攻毒後第15、18和19天，Unvac/ChA組中的5頭豬3頭死於急性呼吸道疾病（死亡率60%）（圖3）。
圖3 每個攻毒組的存活率
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
與Unvac/ChB組的豬不同，Vac/ChB組的豬未觀察到臨床症狀；從攻毒後第3天開始，Unvac/ChB組5頭豬中的4頭表現持續的高溫（≥40℃），持續7天；然而，有一頭豬在攻毒後11-15天持續高溫（≥40℃），並在攻毒後18天死亡。
3、豬隻的抗體反應
五個組所有豬在免疫疫苗前PRRSV特異性抗體均為陰性。Vac/ChA和Vac/ChB組的豬在疫苗免疫後14天用ELISA檢測到抗體；Unvac/ChA和Unvac/ChB組的豬在攻毒後6天開始檢測到抗體（圖4）。免疫疫苗組的S/P值在攻毒後6天達到最高，之後逐漸降低；但是，Unvac/ChA組的最高值在攻毒後10天，Unvac/ChB組的最高值在攻毒後14天。Mock組在整個試驗過程中沒有檢測到PRRSV抗體。所有組的病毒中和試驗結果顯示攻毒後0-21天所有組都沒有檢測到中和抗體（數據未公佈）。
圖4 採用商品化ELISA試劑盒檢測PRRSV特異性抗體
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
S/P值=樣品OD650除以陰性對照OD650。S/P值≥0.4，陽性；S/P˂0.4，陰性。
4、攻毒豬隻的病毒血症
Vac/ChA和Vac/ChB組未檢測到PRRS病毒（表1），而未免疫攻毒組檢測到病毒；Unvac/ChA組中的3頭豬從攻毒後第二天開始帶毒時間分別持續到攻毒後12、14以及16天，而另外2頭豬在攻毒10天之後就停止排毒；在Unvac/ChB組中的4頭豬帶毒時間達4-6天，而另外1頭在攻毒後8-16天檢測到病毒，並最後在此期間死亡；而且Unvac/ChA組每天的帶毒率比Unvac/ChB的高。
5、豬隻體重的變化
在所有四組攻毒後，免疫組的豬隻體重持續增長直到安樂死，而且與空白對照組之間無顯著差異；然而，與疫苗免疫組和對照組相比，未免疫攻毒組所有豬隻的體重很大程度地減輕；Unvac/ChA組的豬隻體重減輕比Unvac/ChB更顯著（圖5）。
圖5 所有試驗組豬隻的體重變化
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
6、病理檢查
攻毒後21天，對所有的存活豬隻進行安樂死並解剖；在未免疫攻毒組中，Unvac/ChA組豬隻表現嚴重的病理變化（實變、出血、更堅固而重出血性肺實質以及淋巴結水腫）；這與Unvac/ChB組豬隻更輕的肺實質以及更少的病理變化不同（圖6）；然而免疫攻毒組既沒有明顯大體病變，對照組豬隻的肺組織也沒有任何病變。
圖6 肺臟（A1-E1）和淋巴結（A2-E2）的肉眼病變
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
A1和A2（Vac/ChA組），C1和C2（Vac/ChB組），E1和E2（對照組）顯示正常的肺臟和淋巴結；B1顯示廣泛肺出血和肺實變，B2顯示淋巴結廣泛性出血；D1顯示輕微的肺實變，D2顯示淋巴結輕微出血。
然而Unvac/ChA組豬隻出現嚴重的間質性肺炎以及急性出血（圖7）。免疫組化染色結果表明在Unvac/ChA和Unvac/ChB組豬隻肺臟出現密度的不同陽性染色；然而對照組豬隻肺臟未出現陽性染色（圖7）。
圖7 肺臟（A1-E1）和淋巴結（A2-E2）的組織病理學檢查和肺臟（A3-E3）的免疫組化檢查
注：Vac/ChA：免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Unvac/ChA：未免疫疫苗+TJ毒株攻毒組；
Vac/ChB：免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Unvac/ChB：未免疫疫苗+HN201605毒株攻毒組；
Mock：用相同劑量PBS處理做空白對照。
A1-A3、C1-C3以及E1-E3顯示正常的肺臟和淋巴結。B1顯示嚴重的支氣管肺炎，B2顯示嚴重的淋巴結出血和淋巴細胞減少症；在B3可以見到陽性染色；D1顯示更輕的間質性肺炎和淋巴組織細胞增多症，D2顯示輕微的淋巴組織增生以及更輕的皮層下增生；在D3可以見到陽性染色；在E3未見到陽性染色。
作者/張賀偉、夏銘崎、王煒、鞠德財、曹龍、吳白、王鑫、武瑩、宋妮、胡嘉欣、田長嘯、張樹成、武華
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