构建噬菌体推荐流程：
1.RNA提取：将用Trizol保存的外周血淋巴细胞转移至1.5mL的离心管，加入1/5体积的氯仿混匀；室温静置5分钟后4度12000g离心15分钟；小心将离心后的上清液转移到新的离心管；往新离心管中加入0.5-1倍体积的异丙醇；室温静置10分钟后4度12000g离心10分钟；使用与Trizol保存的外周血淋巴细胞等体积的75%乙醇清洗沉淀，4度7500g离心5分钟后溶解于适量的无RNA酶的水中。
2.反转录cDNA：按照反转录试剂盒说明书将上一步得到的RNA反转录成cDNA。
3.扩增抗体片段：从反转录的cNDA中扩增特定的抗体片段使用Taq DNA Polymerase Hot Start酶进行PCR扩增。
PCR反应体系为：cDNA模板 2ul，ALPVH-C引物2ul，CALL002引物 2ul，10X Taq Buffer 5ul，dNTP 4ul， Taq（HS） 0.25ul，ddH2O补足到50ul。PCR的反应条件为：98度 3分钟；95度 30秒，57度30秒，68度 40秒，每个循环增加2秒，重复22个循环；68度5分钟。将得到的PCR扩增产物跑琼1%脂糖凝胶电泳，可以看到一条1.0kb左右一条0.7kb左右的两条条带，对0.7kb大小的条带切胶使用天根DNA纯化回收试剂盒按说明书回收。
从上一步PCR扩增并回收后DNA片段中再次扩增特定的抗体片段使用Taq DNA Polymerase Hot Start Version酶进行PCR扩增。PCR反应体系为：DNA模板 2ul，Rvhh-FP引物 2ul，Rvhh-RP引物 2ul，10X Taq Buffer 5ul， dNTP 4ul， Taq（HS） 0.25ul， ddH2O补足到50ul。PCR的反应条件为：98度 3分钟；95度 50秒，55度30秒，72度 40秒，重复12个循环；72度10分钟。将得到的PCR扩增产物使用DNA纯化回收试剂盒按说明书回收。
4.克隆至噬菌体质粒：将上一步扩增得到的抗体基因序列和噬菌体载体使用BglI酶切，酶切体系为：扩增基因12ug或者载体3ug， 10X BglI Buffer 3ul, BglI 4.5ul, 补足水到30ul。酶切在37度反应3-4小时。酶切后使用DNA纯化回收试剂盒按说明书回收载体和扩增基因后进行连接反应。连接反应体系为：载体 200ng，扩增基因 80ng，T4连接酶 2ul，10X连接缓冲液 5ul，加水直至50ul。在4度过夜反应。将连接产物使用DNA纯化回收试剂盒按说明书回收，并使用超纯水溶解。
5.转化SS320：将电转杯置于冰上预冷，待SS320感受态细胞融化后加入1ul回收后的连接产物，将混合后的感受态细胞和连接产物转移到预冷好的电转杯中，使用电转仪预设的Bacteria转化程序电击转化，电转后立即往电转杯中加入1mL SOC培养基，将细胞37度复苏60分钟后涂在含有四环素和氨苄抗性的LB培养板上过夜生长。
将上一步过夜生长后的培养板上的细胞用LB培养基和涂布棒冲洗刮下，加入20%的甘油后保存在-80度。
6.扩增和纯化噬菌体文库：将上一步刮下的数目约为10^9个细胞转移到100mL预先加入四环素和氨苄抗生素的2X YT培养液中，37度220rpm培养直至OD600达到0.5。按照辅助噬菌体：细菌细胞数目为20:1的比例加入辅助噬菌体后继续37度培养30分钟。加入终浓度为的卡那霉素和0.2mM 的IPTG，30度过夜培养。
将过夜培养的细胞4度13000rpm离心5分钟，将上清转移到新的离心管后加入1/4体积预冷的 5X PEG8000/NaCl，在冰上孵育30分钟。4度13000rpm离心10分钟去除上清后加入1mL PBS缓冲液溶解沉淀。再次加入250ul 5X PEG8000/NaCl 后冰上孵育10分钟，4度16000g离心15分钟后去除上清并将沉淀溶解在1mL PBS中得到噬菌体库。
