Red/ET重組系統是微生物基因編輯最經典的方法，可以實現對DNA分子的敲除、點突變、敲入等多種修飾。該技術已被廣泛地用於基因組DNA，如細菌人工染色體、大腸桿菌染色體等的遺傳修飾研究以及基因工程藥物的研究和開發中。但如何提高基因重組和編輯效率，一直是微生物基因編輯的研究熱點，直到CRISPR/Cas9技術的出現，給微生物基因編輯帶來一線曙光。
CRISPR/Cas9是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應性免疫防禦，可用來對抗入侵的病毒及外源DNA。近些年，由於CRISPR-Cas9基因編輯技術操作簡單，基因編輯效率高被廣泛應用，是目前用於基因編輯最前沿的方法。
CRISPR-B™是源井生物在基於Red/ET重組系統和CRISPR/Cas9基因編輯系統基礎上，通過自主研發優化基因編輯載體和基因編輯流程，在基因編輯效率和準確性均遠高於傳統方法的一項創新性技術。該技術可以廣泛應用於細菌和真菌的基因編輯。
CRISPR-B™技術優勢
基因編輯細菌：源井生物利用CRISPR-B™技術通過電轉的方法將CRISPR-B™系列載體導入細菌中，對細菌進行基因編輯，可實現細菌的敲除，點突變或敲入。
傳統的基因敲除技術存在後期篩選工作量大（週期），重組效率低，殘留loxP或FRT位點等缺點。CRISPR-B™技術作為一種高效的基因組編輯技術，具有操作簡單、靶向性強、脫靶率低、無痕等諸多優勢。
CRISPR-B™系列載體 > CRISPR-B _F > 包含有sgRNA、Cas9及篩選標記
技術流程
- 構建 CRISPR-B™細菌系列載體
2. 電轉及製備穩轉CRISPR-B _CR的感受態
- CRISPR-B _CR電轉到細菌中，菌落PCR鑑定CRISPR-B _CR是否成功轉入。
- 並將成功轉入CRISPR-B _CR的菌株再製成電轉感受態細胞。
3. 導入CRISPR-B_G及CRISPR-B _D進行打靶
將打靶載體CRISPR-B_G及CRISPR-B _D修復模板電轉進穩轉CRISPR-B _CR的感受態菌株中，CRISPR系統與Red重組系統共同作用對細菌基因組進行編輯。
4. 挑取單克隆進行PCR及測序鑑定，將CRISPR-B™質粒消去，獲得敲除陽性克隆菌株。
質量控制標準
1. 菌落PCR鑑定 2.靶位點測序鑑定
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