DNA即時保存試劑盒
InstaDNA™ Kit
描述
InstaDNA Kit中提供的Hi705卡設計用於室溫收集、裝運、歸檔各種生物樣品中的核酸，以進行PCR分析。這些樣品包括（但不限於）血液、口頰細胞、組織、培養的細胞，微生物和植物組織。
試劑盒包括
背景
HiMedia的InstaDNA™試劑盒為DNA提取提供了一種快速經濟高效的解決方案，適合分子生物學、研究、臨床、刑事和法醫學應用。
組件包括Hi705™DNA存儲卡和即時DNA提取所需的卡洗脫緩衝液（ID溶液）。
它允許從卡片中即時提取超純級DNA，並用於各種下游的應用如PCR等。
應用
•法醫
•轉基因鑑定
•輸血醫學
•質粒篩選
•食品和農業檢驗
•藥物發現
•基因組學
•STR分析
•動物識別
•全基因組擴增
•分子生物學
Hi705™DNA存儲卡（MBT093）
特徵
•標本基質未經處理，無添加化學物質
•標本乾燥後細胞裂解。當細胞裂解時，DNA被釋放並打開到基質上。
•長期室溫環境存儲DNA，長達21年
•蛋白質在短期應用中是穩定的
優勢
•室溫儲存21年以上，適合各種核酸應用
•可用於樣品自動化操作系統
•過程中無化學物質干擾
•與處理/包被過的卡片相比，成本低
•定量
•蛋白質在短期應用中是穩定的
•血液長期儲存非常棒
•適合非化學處理的卡應用的場合：例如短期的口腔拭子應用
弱點
•不滅活或殺死病原體
•蛋白質只能在短時間內有活性
使用
要使用Hi705卡，只需簡單加樣（液體或擠壓的組織），室溫風乾，然後打孔（其大小取決於實驗應用），取下所打卡紙。卡紙可以不用洗脫，直接擴增。Hi705卡也可以用傳統的樣品製備方法制備（見下文）。
注意：樣品用過後，將Hi705卡存儲在兩個硅膠包的無菌密封袋中。
所需的未提供的材料
•泡沫籤（產品編號：PW1174）（用於口腔樣本）
•封口膜（產品編號：LA018）（用於植物樣本）
•臺式微量離心機（配有適合2.0毫升管的轉子）
•乙醇（96-100％）
•分子生物學級的水（商品編號：ML024）
•加熱裝置
•無菌鑷子
•無菌EP管
•微量移液器和吸頭
步驟
血液樣本的應用（新鮮的全血或或加有某些抗凝劑）：
1. 對Hi705卡進行樣品信息和標識標記。
2. 在卡上的圓形區域內以圓周運動將血液滴到卡上。避免反覆將血液滴在相同位置，使卡上的化學物質過載。此外，不要擦拭或塗抹卡上的血液。
3. 幹血點比新鮮血點顯得更暗。在樣品打孔孔或處理之前，讓卡片徹底的風乾。
4. 完全風乾後， Hi705卡的樣品現已準備就緒，可立即進行操作或存檔。
5. 乾燥所需時間可能因溼度和條件而異。請遵從你的實驗室標準操作程序和指南。
6.進行下游DNA分析（下文）。
口頰細胞樣品的收集和轉移
1. 將Hi705卡放在乾淨、乾燥、平整的表面上。把卡標上適當的樣品信息。
2.使用無菌泡沫棉籤（產品編號：PW1174）（未提供）。去掉棉籤的外包裝。
3. 手持棉籤的塑料手柄，將棉籤頭放在嘴裡，沿著口頰、牙齦和舌下，從口腔的兩側收集細胞。用棉籤頭摩擦口內表面15秒。用棉籤的另一頭在另一側口頰取樣。從嘴中取出棉籤。
4. 在卡上的樣品區域處按壓棉籤。保持棉籤不動，使卡片側面轉動擠壓棉籤至少三次，使樣品區域充分飽和。轉動到棉籤的另一面，並在同一個樣品區域內重複以上過程。
注意：用圓珠筆或鉛筆畫出樣品的位置區域。如果不止一個區域，則需要換棉籤。
5.完全風乾後， Hi705卡的樣品則準備就緒。
細菌樣本（細菌基因組DNA）的應用
1. 樣品濃度可能因樣品種類而異；請遵守您的實驗室標準操作程序和指導原則。
2. 將5-10μl的細菌懸浮液加到Hi705卡上，然後用圓珠筆或鉛筆劃出該區域。
3. 完全風乾後，卡片的樣品準備就緒
組織/細胞培養樣品的收集
1. 組織和培養細胞以濃度>300細胞/μl加到Hi705卡上，以進行核酸分析。
2. 完全風乾後，卡片的樣品準備就緒。
收集植物樣本
直接葉片擠壓
1.將葉片材料直接放在Hi705卡的圓圈上。加上封口膜（產品編號：LA018）（未提供）或類似的塑料膜加上葉子上。
2. 用鈍器（如杵或小錘）施加壓力和/或敲擊葉子。
3. 當提取物透過Hi705卡的背面時，收集過程完成。
4. 完全風乾後，卡片的樣品準備就緒。
下游的DNA分析
準備的通用步驟
稀釋濃縮洗液（DS0012）如下：
使用乙醇（96-100％）1:3稀釋濃縮洗液（DS0012）並充分混合。例如，向1ml濃縮洗液中加入3ml乙醇 （96-100％）。
2.初始洗滌步驟需要在200μl PCR管中加入150μl蒸餾水，每個樣品紙在裡面室溫孵育5分鐘。吸出蒸餾水並棄去。1.將Hi705卡上的樣品區域打孔或切下來，放置到容器中。3.將5μl蛋白酶K（20mg / ml）（商品編號DS0013）加入到150μl稀釋的洗液中（產品編號：DS0012）。 在65℃下孵育樣品30分鐘。丟棄洗液。
4.將另外150μl稀釋的洗液加入到樣品中並室溫孵育3分鐘。丟棄洗液並再重複洗一次。
5.加入200μl TE緩衝液（產品編號DS0086），室溫孵育5分鐘。丟棄洗液。
6.將樣品在56-65°C乾燥或過夜。
7.根據實驗室的標準操作進行樣品PCR擴增程序。
注意：樣品在卡片上製備後，用戶可直接進行PCR擴增或可以從卡片中洗脫出DNA（步驟參見下文），然後進行PCR擴增。
DNA從卡片上洗脫（可選項）
洗脫流程I
注意：洗脫的DNA可能不穩定，不能長期保存。使用者可按照洗脫流程II進行。
1. 要從卡上洗脫DNA，可將處理好的卡片放入含有50μl ID溶液的無菌離心管中（未提供）。
2. 將管在加熱塊上95℃孵育5分鐘。
3. 使用無菌鑷子，從溶液中取出卡片紙（擠壓，以恢復最大體積的洗脫物）。包含有DNA的溶液可以儲存 （2-8℃或-20℃）或進行進一步分析（即PCR）。
洗脫流程II
1. 要從卡上洗脫DNA，可將處理好的卡片放入含有140μl ID1溶液的無菌離心管中（未提供）。
2. 在65℃孵育5分鐘。
3. 加入260μl ID2溶液，脈衝漩渦5次，徹底混勻。
4. 在室溫下孵育樣品10分鐘。脈衝渦旋10次以混合。
5. 使用無菌鑷子，從溶液中取出卡片。含有DNA的溶液可以儲存（短期儲存在2-8°C或長期儲存在-20℃）或直接進一步分析（即PCR）。
DNA擴增方案
1. 樣品卡
a. 口頰拭子樣品：建議打孔或剪去卡上1mm-3mm的樣品區域，用於擴增。將剪下的樣本放入PCR預混液裡。
b. 血液樣品：建議打孔或剪去卡上1mm-3mm的樣品區域，用於擴增。將剪下的樣本放入PCR預混液裡。
注意：如果樣品中的DNA濃度較低，則用戶可以打孔5mm，用於進行PCR擴增。
2. 保證 PCR的反應體積完整。
3.根據實驗室的標準操作流程進行PCR直接擴增
10μl PCR產物上樣在1%的瓊脂糖凝膠上
泳道1: 100bp DNA ladder
泳道2：陰性對照
泳道3：使用MB545（HiPurA™結核桿菌DNA純化試劑盒）提取的結核桿菌（H37RV）DNA的PCR數據
泳道4：點樣在Hi705™DNA存儲卡上的培養的結核桿菌的PCR數據（直接PCR）
泳道5：點樣在Hi705™DNA存儲卡上的培養的結核桿菌的PCR數據（微卡上的DNA洗脫後）
存儲
InstaDNA Kit在環境溫度（15-30°C）下穩定2年。Hi705卡可以在各種溫度下儲存；從環境溫度（即15-30℃）一直到-20℃。
樣品保護和處理
始終戴手套以避免Hi705卡的汙染。處理生物樣本時請遵從您的實驗室的標準操作規程和注意事項。
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