ASF 的準確、快速診斷對於防止 ASF 蔓延、快速撲滅和根除尤其重要。ASFV 自然感染的潛伏期大約為 4—19天 (Wardley et al., 1983),感染後 7-10 天可檢測到抗體。
一個地區或豬場首次暴發 ASF 時呈最急性、急性感染臨床症狀,感染豬隻表現為急性出血、死亡,由於首次暴發時發病豬隻在抗體出現前就已經死亡,此時首選抗原檢測方法。隨著病毒循環和擴散,其毒力會下降,感染豬隻表現
為亞急性和慢性感染臨床症狀 (Bech-Nielsen et al., 1995;
Penrith et al., 2004; Wardley et al., 1983),此時抗體檢測
更適用於疫情的監測和 ASF 根除計劃。
一、臨床診斷
ASF 的臨床症狀和許多其他豬的疾病很相似,特別是豬瘟、豬丹毒和豬高致病性藍耳病等。鑑別診斷依靠病原學或血清學診斷。
ASFV 感染後,發病率一般在 40-85% 之間,死亡率由 ASFV 毒株的毒力決定。高致病性毒株死亡率可高達 90-100%;中致病性毒株在成年動物能引起20-40% 的死亡率,在幼年動物中引起 70-80% 的死亡率;低致病性毒株能夠
造成 10-30% 的死亡率。特急性型 ASF 表現為突然死亡,臨床症狀不明顯。
急性症狀表現為食慾減退、發熱(40-42℃)、肺水腫、淋巴組織廣泛壞死和出血、皮下出血和高死亡率 (Gomez-Villamandos et al., 1995b; Mebus, 1988)。亞急性或慢性感染有時可能會出現鼻出血、便秘、嘔吐,出血性腹瀉。在四肢、耳、胸部、腹部和會陰部位出現不規則的出血斑,這些症狀在感染中等致病毒株的豬中較為明顯。
![非洲豬瘟——臨床診斷檢測](http://p2.ttnews.xyz/loading.gif)
全身臟器出血、壞死是 ASF 的主要臨床表現,具體表現為皮下出血,淋巴結廣泛出血和壞死,嚴重時呈黑色。肺水腫。脾臟腫大、質脆變脆,腎臟、腸繫膜和漿膜出血
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二、病原學診斷
病原學診斷依賴於活病毒、抗原、基因組的檢測,
包括病毒分離、抗原 ELISA、熒光抗體檢測(FAT)、
PCR 和 等 溫 擴 增 分 析 等 方 法。 目 前 實 時 熒 光 定 量
qPCR(Quantitative real-time PCR,qPCR) 使用最為廣泛,
對 ASFV 診斷具有很高的靈敏性和特異性。
ASFV 主要在網狀內皮系統的細胞內複製。可採集的臨床樣品包括抗凝血(EDTA)、脾臟、肝臟、淋巴結和扁桃體 (PJ, 1989)。若需病毒分離,樣品運送過程中需保持
低溫冷藏,不能冷凍。
1、病毒分離
ASFV 可以從血液、脾臟、肝臟、淋巴結和扁桃體等組織中分離。紅細胞吸附(HAD)實驗可用於ASFV檢測。但是後來發現部分 ASFV 毒株呈現 HAD 陰性。
2、熒光抗體檢測(FAT)
用疑似感染 ASF 的豬組織製作塗片或冰凍切片,內源性的抗原可與特異性的 AFSV 熒光抗體結合,顯微鏡直接觀察結果。優點是快速、特異高,對於急性病例的診斷靈敏度較高,但對亞急性或慢性 AFS,由於自身抗體會阻斷熒光抗體與抗原的結合,容易出現假陰性結果。
3、抗原 ELISA
病毒抗原也可用 ELISA 檢測,但只推薦在急性病
例時使用,靈敏度沒有 PCR 檢測方法高 (Steiger et al.,
1992)。第一個直接 ELISA 檢測 ASFV 的方法能檢測的抗原
濃度是 50-500 HAD50/ml (Wardley et al., 1979)。後來基
於 VP72 單抗的雙抗夾心法 ELISA 具有較高的靈敏性 (Vidal
et al., 1997)。
目前 qPCR 被認為是 ASFV 基因檢測的金標準,被用在 OIE 所有的區域性參考實驗室。血液、血清和組織樣本都可用於qPCR檢測。優點是快速、敏感性和特異性都很高。能夠檢測出所有 ASFV 毒株(23 個基因型),甚至因保存不當而降解的樣本也可用於檢測 (Boshoff et al., 2007)。但容易因交叉汙染出現假陽性的結果,此外,因 PCR 抑制物及核酸降解出現的假陰性也應該注意。
King 首次報道 TaqMan 探針熒光定量 PCR 檢測方
法 (King et al., 2003),該方法在 OIE 推薦方法,引物針
對 VP72 保守區域,有很高的特異性和靈敏度,針對 25 種
ASFV 毒株和 16 種非洲及歐洲的軟蜱 ASFV 毒株,靈敏度
達到 10-100 個核酸分子。
三、血清學診斷
豬感染 ASFV 後 7-10 天可出現抗體,抗體可以持續
很長時間,由於目前沒有 ASF 疫苗可用,因此抗體檢測可
作為感染 ASFV 的診斷依據,尤其是針對於亞急性和慢性
ASF,適合大規模抗體篩查。在 ASF 根除計劃中有很重要
的作用。
ASFV 編碼多種蛋白,具有診斷意義的蛋白主要有
p72,p54, p30(p32) 和 p62 蛋白。常用抗體檢測方法主要
有ELISA,間接免疫熒光實驗(IIF)、對流免疫電泳(IEOP)
和免疫印跡 (IB) 等。
最早用於ASF抗體檢測的是對流免疫電泳(IEOP)(Pan
et al., 1972),後來被敏感性更高的 ELISA 取代,國際間貿易
多用 ELISA 檢測。鑑於 ELISA 檢測容易出現假陽性結果,陽
性樣本需要再次進行 IIF 或 IB 檢測確認。IB 可對結果作出一
個簡單客觀的解釋 (Alcaraz et al., 1990; Pastor et al., 1989)。
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