馬伊琍15歲時參加上海電視臺的綜藝舞蹈隊，正式自食其力自己賺取學費
1993年，被選中主演電影《劉海粟》，那是她的第一次觸電經歷，收穫800元片酬
1994年，考入上海戲劇學院94級表演系本科
1996年，在電視劇《真空愛情記錄》中飾演夏文心，講述了一群大學畢業生為了工作和愛情奮鬥的故事
1998年，畢業於上海戲劇學院，畢業後參演了第一部改編自陝西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》
2000年，出演了《黑洞》飾演演三陪女
2001年，出演電視劇《白天睡覺的女人》飾演李秀
2002年，因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中夏紫薇一角而被大眾所熟知
2004年，出演了由黃磊指導的《天一生水》飾演一個混血姑娘明妮
2005年，出演張黎導演的電視劇《錦衣衛》
2006年，參演《喬家大院》扮演的“江雪瑛”
2007年，出演由趙寶剛指導的青春勵志電視劇《奮鬥》夏琳一角而知名度得到進一步的提升
2008年，因拍電視劇《為誰心動》時無悔剃光了頭，憑藉影片《江北好人》，馬伊琍戰勝了李冰冰、范冰冰兩位大熱候選人，成為了長春電影節影后
2010年，與塗松巖領銜主演的都市題材電視劇《雙城生活》反映了“雙城戀”話題
2013年，年初馬伊琍與杜淳、劉莉莉、陳思斯等眾多明星合作的電視劇《青春期撞上更年期Ⅱ》
2016年1月，與陳建斌領銜主演的當代都市幽默輕喜劇《中國式關係》2018年，憑藉電影《那些女人》第21屆上海國際電影節電影頻道傳媒關注單元最佳女配角獎
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