良好的样品制备是电镜酶细胞化学技术成功的关键。酶电镜安排化学样品制备要求既要保存酶的活性，一起又要保存细胞的超微结构。并能避免酶反响产品扩散。每种酶对固定液的要求和显现办法虽不尽相同．但电镜酶安排化学的根本程序相似，下面简要介绍其根本要求：
1．选材 安排标本的选材是样品制备的*步，非常重要?所以，选材前应做好计划和充分准备。原则上。方针要明确，操作要迅速。临床标本选材时还应留意：①活检钳的刀口有必要锋利。以免揉捏安排：②选材部位有必要是主要病变区；③手术标本除病变部位外，还应别离取病灶与正常安排接壤区和远距病灶区的正常安排作对照。
2．固定 常用的固定剂为2％～4％多聚甲醛和0．5％～2％戊二醛．以0．1mol／LPB或二甲胂酸钠缓冲液（pH 7．4）制造，固定时刻为30—60分钟（4℃）。留意：固定液的浓度越高，时刻越长，越易引起酶失活；关于不同安排和酶，zui好经过预试验选择合适的固定液浓度和固定时刻。
3．漂洗 用与制造固定液相同的缓冲液充分漂洗安排，4℃，1～2小时为宜。
4．切片 安排标本经含蔗糖的缓冲液浸洗3小时以上，用振动切片机或冰冻切片机将安排切成30—50gm厚片，有利于孵育液从切片双面充分浸透人安排中，与细胞内的酶反响。
5．预孵育 切片经充分漂洗后用不含底物的孵育液预孵10分钟。
6．孵育 将切片移至含恰当底物和捕捉剂的液体孵育，使其发作特异的细胞化学反响。孵育的温度和时刻通常以35℃、30～60分钟为宜，温度不宜超过37℃，温度过高或孵育时刻过长，简单导致反响产品的弥散。
留意：为得到较抱负的试验成果．zui好经过预试验确定孵育温度和时刻；应根据试验需求于用前新鲜制造相应的孵育液；所用试剂纯度要高，器皿须清洁；孵育液中底物和捕捉剂的浓度、pH值和缓冲液的缓冲才能等有必要配合恰当。别的。制造孵育液应按配方顺次加入各种试剂，应一种试剂溶解后再加入另一种试剂，zui终制造的孵育液应明澈通明，必要时，可过滤除掉沉积后使用。
7．后处理 一般用冷缓冲液漂洗切片停止孵育，继之用2．5％戊二醛进一步固定，并根据需求可用1％OsO，进行恰当的后固定（4℃。30～60分钟）。留意：OsO4固定后，酶反响产品易溶于水，故Os（）：固定时刻以不超过60分钟为宜。
8．脱水、包埋、超薄切片制作、电子染色以及调查 按*节常规电镜办法进行。可是脱水时刻可缩短1／2左右。留意：初度试验zui好不对超薄切片进行电子染色而直接进行电镜调查．以了解安排细胞超微结构的保存和反响产品的分布情况，承认电子染色是否影响酶细胞化学反响产品的电镜调查。
9．对照试验 为确保试验成果的可信性，任何试验办法均需必要的对照试验，酶安排细胞化学技术特别如此。判定酶细胞化学反响特异性的办法较多。主要包含在孵育液中不加底物，或加入酶的特异性抑制剂，或选用热变性及消化等办法使酶失活，对照试验应不存在酶反响的沉积产品。
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